[发明专利]人用狂犬疫苗毒种在人二倍体细胞上的快速适应方法有效
| 申请号： | 201310463715.6 | 申请日： | 2013-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN103468649A | 公开（公告）日： | 2013-12-25 |
| 发明（设计）人： | 杨喆;马波;何丽芳;王丽丽;李伟;陈敏;王馨;尹孝兵 | 申请（专利权）人： | 云南沃森生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 650106 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人用狂犬疫苗毒种在人二倍体细胞上的快速适应方法，将新鲜狂犬病毒接种人二倍体细胞上，带毒传代，仅需4-5个循环，传代12-15代，病毒滴度从第P1代的3.0logLD50/ml升至P15代的7.0logLD50/ml以上，缩短病毒的适应周期至少50%，在不影响病毒免疫原性的前提下快速提高病毒产量，节约人力物力。 | ||
| 搜索关键词： | 狂犬 疫苗 二倍 体细胞 快速 适应 方法 | ||
【主权项】：
一种人用狂犬疫苗毒种在人二倍体细胞上的适应方法，该方法包括下列步骤：1）将新鲜狂犬病毒按0.0001‑1MOI接种入分散为单个细胞的人胚肺二倍体细胞悬液中，在30‑40℃吸附30‑90分钟，补加细胞培养液至合适体积，30‑40℃培养，2‑5天成致密单层，弃细胞培养液，换病毒维持液，再培养3‑7天，收获培养上清液，补加5‑30%牛血清置低温冻存，并标为人二倍体细胞培养病毒P1代；2）带毒细胞消化传代，依1:1‑1:3的传代比率传代，生长2‑5天细胞成致密单层后换病毒维持液，30‑40℃培养3‑7天，收获上清冻存，标为人二倍体细胞培养病毒P2代；3）再次带毒细胞消化传代，依1:1‑1:3的传代比率传代，生长2‑5天细胞成致密单层后换病毒维持液，30‑40℃培养3‑7天，收获上清冻存，标为人二倍体细胞培养病毒P3代；接种步骤3）收获的病毒，重复步骤1），2），3），为一个循环，经过4‑5个循环，获得对人二倍体细胞敏感的狂犬疫苗毒种。
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