[发明专利]D‑叔亮氨酸的一种生物催化制备方法

摘要

本发明公开了一种新的利用来源于Symbiobacterium thermophilum内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶(StDAPDH)突变体生物催化剂来还原氨化合成光学纯D‑叔亮氨酸的方法。其特征在于将StDAPDH蛋白质序列的121位或在同源性比较相当于121位的色氨酸(W)替换为亮氨酸(L)，146位或在同源性比较相当于146位的苯丙氨酸(F)替换为亮氨酸(L)，227位或在同源性比较相当于227位的组氨酸(H)替换为苯丙氨酸(F)，并将这三个位点突变组合成三突变体。利用三突变体纯酶建立催化反应体系，配合辅酶NADPH循环体系，还原氨化合成光学纯D‑叔亮氨酸，所合成D‑叔亮氨酸产物的ee值大于99％。

主权项

一种利用内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体作为生物催化剂来合成光学纯度＞99％D‑叔亮氨酸的方法，包括：对来源于Sybiobacterium thermopilum内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶StDAPDH进行组合突变，StDAPDH蛋白序列特征在于序列的121位或在同源性比较相当于121位的色氨酸(W)替换为亮氨酸(L)；146位或在同源性比较相当于146位的苯丙氨酸(F)替换为亮氨酸(L)；227位或在同源性比较相当于227位的组氨酸(H)替换为苯丙氨酸(F)；所述突变体为上述三位点突变组合；以获得的组合突变体为生物催化剂，以3，3‑二甲基‑2‑羰基丁酸与氯化铵作为底物构成的反应体系，加入辅酶循环体系进行催化还原胺化反应，制得光学纯度＞99％的D‑叔亮氨酸；辅酶循环体系包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH或NADP+)，葡萄糖，葡萄糖脱氢酶(GDH)。