[发明专利]一种鸡常见食源性细菌四重荧光PCR检测试剂盒及使用方法

摘要

本发明公开了一种鸡常见食源性细菌四重荧光PCR检测试剂盒及使用方法，试剂盒包含了荧光PCR反应液以及产气荚膜梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7和空肠弯曲杆菌的标准品，其中荧光PCR反应液含有TaqDNA聚合酶、PCR反应缓冲液、Mg2+、dNTPs、四对细菌的特异性引物和相应的四种荧光探针。本发明运用四重荧光PCR，能快速、准确地检测产气荚膜梭菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7和空肠弯曲杆菌4种鸡携带的主要食源性病原菌，可用于细菌的鉴定、疾病的诊断和流行病学调查。

主权项

一种鸡常见食源性细菌四重荧光PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：荧光PCR反应液、阳性对照，四对细菌的特异性引物：CP01、CP02、SE01、SE02、EC01、EC02、CJ01、CJ02和四种荧光探针：CPP、SEP、ECP、CJP；所述的荧光PCR反应液为：rTaq DNA聚合酶、不含Mg2+的10×PCR反应缓冲液、25mM Mg2+和10mM dNTPs；所述的阳性对照为：产气荚膜梭菌；沙门氏菌；大肠杆菌O157:H7和空肠弯曲杆菌的标准品或产气荚膜梭菌cpa基因阳性质粒；沙门氏菌invA基因阳性质粒；大肠杆菌O157:H7 rfbB基因阳性质粒和空肠弯曲噶杆菌ccoN基因阳性质粒；所述的特异性引物为：CP01： 5’ TGTAAGGCGCTTATTTGTGCT 3’CP02： 5’ CCCTTGAGTTACAATCATAGCATG 3’SE01： 5’ GCTGCTTTCTCTACTTAACAGTGC 3’SE02： 5’ CCAGTACGATATTCAGTGCGATC 3’EC01： 5’ TTCATGATGCTGTGGAAAACA 3’EC02： 5’ TGCTTGCAGAAGCCATATCA 3’CJ01： 5’ TACAGATTGGATTCCAGGACA 3’CJ02： 5’ CTATACCTGTGGTTTGGATCCA 3’所述的特异性探针为：CPP ：5’ FAM‑ACGCTAGCAACTAGCCTATGGGCTGG‑BHQ1  3’SEP ：5’ TAMRA‑TCGTTTACGACCTGAATTACTGATTCTGGTAC‑BHQ2  3’ECP ：5’ ROX‑TTCTCCGAATGTTGTTGTTTGGGGAAG‑BHQ2  3’CJP ：5’ HEX‑TTCATGATGGAACATTAGGTTGGGTAGGAT‑BHQ2  3’。