[发明专利]一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法

摘要

本发明公开了一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法。采用方法的要点是将绿色木霉接种于察氏培养基上活化，挑取单菌落接种于液体活化培养基中扩大培养得到种子液，按照体积比1:10～20的接种量接种于液体产酶培养基中，40至60目毛竹粉5～20g/L作为发酵底物，液体发酵72～120h制备纤维素酶。该方法稳定、高效，特别适用于绿色木霉发酵产纤维素酶。本发明针对绿色木霉生理特性优化得到一套高效液体发酵工艺，可以获得高酶活力的纤维素酶；同时提出资源化利用毛竹原料作为纤维素酶诱导底物，制备高附加值生物酶制剂，是高值化利用毛竹资源的一条创新思路，可切实提高我国竹区农民的经济收入，具有重要的现实意义。

主权项

一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将未经活化的绿色木霉（Trichoderma viviride）在无菌环境中以无菌水溶解，采用平板划线法将菌种接种于察氏培养基（czapck）上，在24～32℃的恒温培养箱中培养72～168h，至生长出单菌落，得到经过活化的绿色木霉；2）将步骤1）得到的经过活化的绿色木霉在无菌环境中挑取单菌落，接种于液体活化培养基中，在24～32℃、180～260r/min的恒温振荡器中培养48～72h，得到扩大培养的种子液；3）将步骤2）得到的扩大培养的种子液按照体积比1:10～20的接种量接种于液体产酶培养基中，按照60%的装入量装入发酵罐中，产酶培养制备纤维素酶，控制发酵液pH值3～7、发酵温度24～32℃、通气量1:0.4～1.2、发酵时间72～120h，得到的发酵液在4000r/min的冷冻离心机中离心10min，采用截留分子量100～500k的聚醚砜膜浓缩使其浓度提升20倍，得到纤维素酶。