[发明专利]一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法

权利要求书

1.一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将未经活化的绿色木霉（Trichoderma viviride）在无菌环境中以无菌水溶解，采用平板划线法将菌种接种于察氏培养基（czapck）上，在24～32℃的恒温培养箱中培养72～168h，至生长出单菌落，得到经过活化的绿色木霉；

2）将步骤1）得到的经过活化的绿色木霉在无菌环境中挑取单菌落，接种于液体活化培养基中，在24～32℃、180～260r/min的恒温振荡器中培养48～72h，得到扩大培养的种子液；

3）将步骤2）得到的扩大培养的种子液按照体积比1:10～20的接种量接种于液体产酶培养基中，按照60%的装入量装入发酵罐中，产酶培养制备纤维素酶，控制发酵液pH值3～7、发酵温度24～32℃、通气量1:0.4～1.2、发酵时间72～120h，得到的发酵液在4000r/min的冷冻离心机中离心10min，采用截留分子量100～500k的聚醚砜膜浓缩使其浓度提升20倍，得到纤维素酶。

2.根据权利要求1所述的一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法，其特征在于：所述的液体活化培养基配方为：葡萄糖10～20g/L、蛋白胨1～2g/L、Tween800.2～0.4g/L、硫酸铵1～2g/L、磷酸二氢钾1～3g/L、硫酸镁0.1～0.3g/L、氯化钙0.1～0.3g/L、尿素0.4～0.8g/L、占液体活化培养基总体积10～20%的Mandels营养盐、溶剂为pH=3～7的磷酸缓冲液（PBS），120℃高压蒸汽灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的一种高效发酵绿色木霉制备纤维素酶的方法，其特征在于：所述的液体产酶培养基配方为：葡萄糖4～6g/L、40至60目毛竹粉5～20g/L、Tween800.2～0.6g/L、硫酸铵1～3g/L、磷酸二氢钾3～5g/L、硫酸镁0.3～0.5g/L、氯化钙0.3～0.5g/L、尿素0.8～1.2g/L，占液体产酶培养基总体积0.1～0.3%的Mandels微量元素、溶剂为pH=3～7的PBS，120℃高压蒸汽灭菌20min。