[发明专利]高活性重组人糜蛋白酶制备方法和应用有效
| 申请号： | 201310323446.3 | 申请日： | 2013-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN104342423B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 赵致;安少朋 | 申请（专利权）人： | 上海雅心生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76;A61K38/48;A61P17/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 31100 上海专利商标事务所有限公司 | 代理人： | 陈静<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 201802 上海市嘉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及高活性重组人糜蛋白酶制备方法和应用。本发明的方法包括表达人糜蛋白酶包涵体，之后对其进行变性和复性处理、纯化，复性过程中调节特定的PH值、温度、稀释比例、添加剂成分，有效地提高了可溶性蛋白的得率，所获得的可溶性蛋白可良好地恢复天然态结构以及保持生物学活性，阳离子交换色谱相对于阴离子交换色谱更适合于重组人糜蛋白酶的纯化，获得高纯度、高活性的重组人糜蛋白酶。重组人糜蛋白酶与糜蛋白酶应用与大鼠烫伤模型具有同样的效果。 | ||
| 搜索关键词： | 活性 重组 蛋白酶 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种制备高活性人糜蛋白酶的方法，其特征在于，所述方法包括步骤如下：/n(1)将人糜蛋白酶的包涵体进行变性，分离含有经变性的人糜蛋白酶的上清；/n(2)应用复性液进行复性，所述复性液包括100±10mM Tris-HCl；复性时，调节pH8.0±0.2、温度2～20℃、复性液:变性液的体积比大于8，经激活获得可溶的高活性人糜蛋白酶；所述的复性液中，还添加激活剂重组胰蛋白酶、按照体积0.1-0.8％甘油以及1-10mM GSH。/n
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