[发明专利]一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201310309931.5 | 申请日： | 2013-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN103555642A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 刘立明;牛盼清;董晓翔 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/06;C12P7/50;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明阐述了一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法及其应用，属于基因工程与酶学品领域，将重组产生的L-氨基酸氧化酶包涵体进行蛋白变性、复性和浓缩，使蛋白包涵体恢复活性;蛋白表达量最佳诱导条件为37℃，IPTG0.5mmol/L诱导5h；通过对重组酶的酶学性质研究，发现重组酶最适pH8.0，最适温度45℃，外源添加FAD对酶活力没有影响；结合酶学特征，将重组酶添加到含有10g/L的谷氨酸钠pH8.0的缓冲液中，45℃转化6h可以生成5.3g/L的α-酮戊二酸，转化率达到50％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一株产 氨基酸 氧化酶 重组 菌株 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一株产L‑氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法，其特征如下：1)将L‑氨基酸氧化酶基因与质粒pET28a重组构建重组质粒，表达于E.coli BL21中构建一株重组菌株，具有产生L‑谷氨酸氧化酶能力;2)该菌株蛋白表达量经过优化最佳条件为温度30‑37℃，添加IPTG0.3‑0.5mmol/L诱导4‑6h，目的蛋白含量达到总蛋白20％以上；3)该菌株生产的L‑氨基酸氧化酶是包涵体，没有活性。
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