[发明专利]一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法及其应用

权利要求书

1.一株产L-氨基酸氧化酶的重组菌株的构建方法，其特征如下：

1)将L-氨基酸氧化酶基因与质粒pET28a重组构建重组质粒，表达于E.coli BL21中构建一株重组菌株，具有产生L-谷氨酸氧化酶能力;

2)该菌株蛋白表达量经过优化最佳条件为温度30-37℃，添加IPTG0.3-0.5mmol/L诱导4-6h，目的蛋白含量达到总蛋白20％以上；

3)该菌株生产的L-氨基酸氧化酶是包涵体，没有活性。

2.根据权利要求1所述重组菌株产生的L-氨基酸氧化酶包涵体，经过蛋白变性，复性，浓缩，使30％以上的蛋白包涵体恢复活性。

3.根据权利要求2得到的具有活性的L-氨基酸氧化酶，其酶学性质如下：

1)最适pH范围为7.0-9.0；

2)最适温度为35-45℃，重组酶在20-50℃放置12h，酶的比活力保持在70％以上；

3)重组酶底最适底物为L-鸟氨酸其次是L-赖氨酸、L-丙氨酸，该重组酶底物范围较广；

4)外源添加FAD对重组酶的活力没有影响。

4.根据权利要求1和2得到的有活性的重组酶可以将L-谷氨酸和谷氨酸钠转化生成α-酮戊二酸，转化率大于50％，转化条件：底物谷氨酸钠浓度为7.5-12.5g/L，pH7.0-9.0，35-45℃转化6-8h。