[发明专利]一种同步检测5种植物病毒的方法

摘要

本发明涉及一种同步检测5种植物病毒的方法，该方法包括植物总RNA的提取、逆转录反应制备cDNA模板，多重PCR反应，电泳检测确定病毒种类。通过设计5种病毒的特异性引物，对引物浓度及PCR反应条件进行优化，实现了同步检测5种植物病毒。本发明检测方法快速准确，避免了普通PCR检测的重复性，检测稳定性好，特异性强，适用于对植物样品进行快速检测，从而指导作物生产，减少病害损失。

主权项

一种同步检测5种植物病毒的方法，其特征在于通过以下步骤实现：（1）取待测植物叶片，提取总RNA ，以提取的总RNA为模板，反转录为cDNA；（2）以cDNA为模板，采用下列5对引物进行多重PCR扩增，得到扩增产物；第1对引物：CMV‑F：5'‑GATAAGAAGCTTGTTTCGCG‑3'CMV‑R：5'‑GCTCGATGTCGACATGAAGT‑3'第2对引物：TuMV‑F：5'‑GTGCATTGAGAACGGAACCTC‑3'TuMV‑R：5'‑GATTAACGTCCTCGGTCGTATG‑3'第3对引物：PVX‑F：5'‑GGATCCATGACTGCACCAGCTAGC‑3'PVX‑R：5'‑GAATTCTGGTGGTGGTAGAGTGAC‑3'第4对引物：PVY‑F：5'‑GCGCGGATCCGCAAATGACACAATGGCATGCAG‑3' PVY‑R：5'‑GCGCGGTACCTCACATGTTCTTGACTCCAAGT‑3'第5对引物：TMV‑F：5'‑CAGCTGCTATTGACCTTGAAAC‑3'TMV‑R：5'‑CAATATCAATGATGCCAGAC‑3'（3）用TAE电泳缓冲液配制1％琼脂糖凝胶，取8μL PCR产物在水平电泳槽中进行电泳，120V/100mA电泳35分钟，根据条带图判定病毒种类；5种植物病毒为：烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus，TuMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）和马铃薯X病毒（Potato virus X，PVX）。