[发明专利]一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法，首先采用多氯联苯半抗原化学合成完全抗原，然后将完全抗原作为免疫原，通过动物免疫方法制备得到多氯联苯单克隆抗体。其中半抗原合成完全抗原采用碳二亚胺法，动物免疫采用小剂量长周期免疫方案。本发明制备的多氯联苯单克隆抗体特异性强、亲和力好，抗体参数可控、工艺简单，利于放大生产、实用性强。此法制备的多氯联苯抗体效价达2×107，所制备的抗体冻干后，-20℃超低温保存，其稳定性至少可保持12个月以上。

主权项

一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法，其特征在于：首先采用多氯联苯半抗原化学合成完全抗原，然后将完全抗原作为免疫原，通过动物免疫方法制备得到多氯联苯单克隆抗体；其中半抗原合成完全抗原采用碳二亚胺法，包括以下步骤：     (1)首先配置浓度为1~3mg/100ul的半抗原TE buffer溶液、浓度为0.2~0.5mg/100ul的牛血清蛋白TE buffer溶液和浓度为20~40mg/100ul的碳二亚胺TE buffer溶液；(2)磁力搅拌下，将半抗原TE buffer溶液加入含牛血清蛋白TE buffer溶液中得到混合溶液，混合溶液边震荡边滴加碳二亚胺TE buffer溶液，半抗原与牛血清蛋白的反应质量配比为 1:0.1~1:0.5，半抗原与碳二亚胺的质量比为1：16左右，然后将装有三种溶液的容器放于摇床中于35‑37℃条件下震荡反应2~4 h，反应得到偶联物，即完全抗原；(3)用Sephadex柱将步骤(2)容器中反应得到的偶联物和未结合的半抗原小分子分离，然后将分离出来的偶联物溶液装入透析袋透析纯化，在pH为7. 2的0. 01 mol/L 磷酸盐缓冲液PBS中于4℃条件下透析3天，每天换液2次，去除游离小分子化合物，离心分出上清液得 PCB‑BSA，经紫外可见分光光度计扫描鉴定后，PCB‑BSA偶联物分装后于‑ 20 ℃保存备用。