[发明专利]一种多氯联苯单克隆抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体的制备方法，特别涉及一种水体环境中激素污染物多氯联苯的免疫检测特异性单克隆抗体的制备。 

  

背景技术

多年来，持久性有机污染物(POPS)除了其直接毒性外，还因为其高残留性、高富集性以及对各种生物乃至人类的危害而引起世界性的广泛关注，其中多氯联苯( polychlorinated biphenyls, PCBs)是其中最具有代表性的一类。由于PCBs具有特殊的物理化学性质，从其生产以来就得到广泛应用，但由于消费过程中渗漏或有意、无意的废物排放，己造成了PCBs大范围的污染，并且通过食物链对生物体产生影响。同时由于PCBs的低溶解性、高稳定性和半挥发性等使其能够作远程迁移，从而造成“全球性的环境污染”。多氯联苯具有亲脂性和持久性，在食物网中呈现出很高的生物富集特性。据报道水鸟体内PCBs浓度可达水中浓度的50-100万倍，呆头鱼内的生物浓缩系数为120000~270000倍。动物实验表明，PCBs对皮肤、肝脏、胃肠系统、神经系统、生殖系统、免疫系统等都有诱导效应。而且一些PCBs同类物会影响哺乳动物和鸟类的繁殖，对人类也具有潜在致癌性。因此，多氯联苯作为一种受全球广泛关注的激素类环境污染物，其检测方法一直是科学技术领域的研究热点。目前这类化合物的检测方法多以GC、HPLC 和GC/MS、HPLC/MS 为主，运用上述常规的仪器分析方法进行检测，前处理技术复杂、时间长、费用高，难以满足快速鉴定诊断的需要。近年来，具有特异性强、简单快速、灵敏度高等优点的酶联免疫吸附测定法(ELISA) 受到广泛重视，在环境污染物的快速筛查中显示了其独特的优势。 

基于高特异性抗体的环境污染物免疫检测技术，是目前有毒有害有机污染物（POPs、EDCs等）、藻类毒素、农药残留、生物毒素等快速检测的重要手段。美国在环境免疫检测领域处于国际领先地位，其开发的环境小分子污染物的免疫检测技术数量也位于世界前列。此外，日本、印度和欧盟一些国家也相继开发了一些环境污染物的免疫检测技术并申请了专利，主要为农药类和二恶英等。而多氯联苯化合物作为重要的工业原料或中间体被大量地生产和应用，其免疫检测方面的研究和专利报道却较少，因此，有必要开发这些污染物的应急监测及快速筛查免疫检测技术。高特异性的抗体是免疫检测方法的核心材料，也是影响检测结果灵敏性、选择性的重要因素。由于环境污染物多半是小分子物质（分子量<2，000Da）。其本身不具备免疫原性，免疫学上属于半抗原，不能刺激动物机体产生抗体，只有与大分子物质偶联成完全抗原才能促使动物机体产生免疫反应，从而获得抗体，因此，合成并纯化免疫性能良好的环境污染物的完全抗原，是研究和开发其免疫检测技术首要的关键步骤和技术难点。