[发明专利]一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法

摘要

本发明涉及一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，包括发酵液蛋白酶的失活，发酵液中乳酸片球菌素PA-1的释放，板框过滤除菌和颗粒状杂质，微滤除大分子杂质，二步超滤：即第一步选用截留分子量为10000-30000道尔顿的超滤膜，主要目的是除去大分子蛋白、核酸和胶体等，第二步选用截留分子量为1000-3000道尔顿的超滤膜，主要目的是除去小分子杂质并浓缩。最后将浓缩液经C18制备色谱纯化并冷冻干燥或加入食盐填料，进行喷雾干燥得到粉末状成品。本发明工艺方法全程流体操作、能耗低、劳动强度低、条件温和、易于工业放大、适用于多种后续纯化方法；产品质量稳定；不消耗有机溶剂，安全环保。

主权项

一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA‑1的方法，其特征在于：步骤如下： ⑴发酵液预处理 取含乳酸片球菌素PA‑1的发酵液，60‑80℃恒温水浴处理30‑60分钟，冷却至20‑30℃，用浓盐酸调节pH至2.0‑3.0，搅拌，释放乳酸片球菌素PA‑1于发酵液中； ⑵板框过滤 在发酵液中加入0.5‑1.2%的助滤剂，搅拌，进行板框过滤，弃去滤饼，收集滤液； ⑶微滤除杂 将板框过滤后的滤液在温度25‑35℃，压力为1.0‑1.5MPa下通过金属氧化膜或陶瓷膜过滤，膜的孔径为5μm，微滤至体积浓缩比3‑6倍时，开始洗滤，洗滤液的体积和浓缩液体积相同，最终使浓缩液为初始进料液体积的4‑7%，渗透液为乳酸片球菌素PA‑1的粗提液； ⑷超滤除杂 步骤⑶得到的渗透液在温度20‑30℃，压力为0.05‑0.1MPa下，通过截留分子量为10000‑30000道尔顿的超滤膜，超滤至体积浓缩比为4‑6时，加入和浓缩液等量的水进行洗滤，至最终浓缩液为料液体积的4‑10%为止，收集滤液； ⑸超滤除杂浓缩 步骤⑷得到的滤液通过截留分子量为1000‑3000道尔顿的超滤膜过滤，超滤操作温度20‑30℃，压力为0.05‑0.1MPa，超滤至体积浓缩比为8‑12时为止，收集浓缩液； ⑹喷雾干燥 步骤⑸得到的浓缩液，加入填料固体食盐，在喷雾干燥机进行干燥，进口温度为120‑170℃，出口温度为70‑90℃，使喷雾干燥后含盐量为25‑35%，喷雾干燥，即得乳酸片球菌素PA‑1。