[发明专利]一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法

权利要求书

1.一种从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：步骤如下： 

⑴发酵液预处理 

取含乳酸片球菌素PA-1的发酵液，60-80℃恒温水浴处理30-60分钟，冷却至20-30℃，用浓盐酸调节pH至2.0-3.0，搅拌，释放乳酸片球菌素PA-1于发酵液中； 

⑵板框过滤 

在发酵液中加入0.5-1.2%的助滤剂，搅拌，进行板框过滤，弃去滤饼，收集滤液； 

⑶微滤除杂 

将板框过滤后的滤液在温度25-35℃，压力为1.0-1.5MPa下通过金属氧化膜或陶瓷膜过滤，膜的孔径为5μm，微滤至体积浓缩比3-6倍时，开始洗滤，洗滤液的体积和浓缩液体积相同，最终使浓缩液为初始进料液体积的4-7%，渗透液为乳酸片球菌素PA-1的粗提液； 

⑷超滤除杂 

步骤⑶得到的渗透液在温度20-30℃，压力为0.05-0.1MPa下，通过截留分子量为10000-30000道尔顿的超滤膜，超滤至体积浓缩比为4-6时，加入和浓缩液等量的水进行洗滤，至最终浓缩液为料液体积的4-10%为止，收集滤液； 

⑸超滤除杂浓缩 

步骤⑷得到的滤液通过截留分子量为1000-3000道尔顿的超滤膜过滤，超滤操作温度20-30℃，压力为0.05-0.1MPa，超滤至体积浓缩比为8-12时为止，收集浓缩液； 

⑹喷雾干燥 

步骤⑸得到的浓缩液，加入填料固体食盐，在喷雾干燥机进行干燥，进口温度为120-170℃，出口温度为70-90℃，使喷雾干燥后含盐量为25-35%，喷雾干燥，即得乳酸片球菌素PA-1。 

2.根据权利要求1中所述的从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述助滤剂为硅藻土或珍珠岩。 

3.根据权利要求1中所述的从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述超滤膜为中空纤维膜。 

4.根据权利要求1中所述的从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：所述步骤⑸超滤除杂浓缩后经过如下步骤，获得乳酸片球菌素PA-1的白色粉末： 

⑺C18制备色谱纯化 

步骤⑸得到的浓缩液，经反相C18制备色谱纯化，收集保留时间15.0-15.4分钟的蛋白峰为乳酸片球菌素PA-1活性峰； 

⑻冷冻干燥 

步骤⑺得到的活性峰溶液，可直接冷冻干燥为乳酸片球菌素PA-1的白色粉末。 

5.根据权利要求4中所述的从发酵液中分离提取乳酸片球菌素PA-1的方法，其特征在于：步骤⑺的色谱条件如下： 

流动相：A，5%乙腈，含0.1%三氟乙酸；B，80%乙腈，含0.1%三氟乙酸；梯度洗脱程序为0～5min，100%A；5～30min，100%A～100%B；30～35min，100%B；35～42min，100%B～100%A；42～45min，100%A；流速：3mL·min^-1，检测波长：280nm。