[发明专利]小而密低密度脂蛋白中的胆固醇的定量方法

摘要

本发明提供一种sdLDL-C的定量方法，其中包括：步骤(i)，在含有优先抑制由胆固醇酯水解酶等胆固醇测定用酶引起的sdLDL-C的反应的表面活性剂的反应液中，使该胆固醇测定用酶作用于样品，除去该样品中的HDL-C、VLDL-C、CM-C以及LgLDL-C；步骤(ii)，添加引发在所述步骤(i)后的反应液中残留的sdLDL-C的反应的试剂，生成过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶；以及步骤(iii)，由(i)和(ii)中的测定值、与预先制作的标准曲线来确定该样品中的sdLDL-C浓度。

主权项

一种样品中的sdLDL‑C的定量方法，包括下述步骤(i)、(ii)和(iii)：步骤(i)：在含有表面活性剂A的反应液中，使胆固醇酯水解酶和胆固醇氧化酶、或者胆固醇酯水解酶、胆固醇脱氢酶和氧化型辅酶作用于样品，除去该样品中的高密度脂蛋白中的胆固醇、极低密度脂蛋白中的胆固醇、乳糜微粒中的胆固醇以及大而轻低密度脂蛋白中的胆固醇，其中，所述表面活性剂A是选自聚氧乙烯烷基胺、选自烷基氧化胺和聚氧乙烯烷基氧化胺的氧化胺类、烷基甜菜碱、烷基铵‑1‑丙磺酸盐、酰胺烷基甜菜碱、聚氧乙烯苄基‑烷基季铵盐、聚氧乙烯脂肪酰胺、聚氧乙烯多环苯基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯烷基苯基醚硫酸酯盐、聚氧乙烯脂肪酰胺硫酸酯盐、聚氧乙烯烷基胺硫酸酯盐、N‑酰基牛磺酸盐、N‑酰基肌氨酸盐、乙二胺‑聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物、分子量为1200以下的聚丙二醇、由下述通式(I)表示的聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物、以及烷基的碳原子数为9以下的聚氧乙烯聚氧化烯烷基醚中的表面活性剂，HO‑(C3H6O)a‑(C2H4O)b‑(C3H6O)c‑H      (I)通式(I)中，a、b及c相同或者不同，表示1～200的整数；步骤(ii)：添加表面活性剂B，生成过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶，其中，所述表面活性剂B是选自HLB低于15.0且烷基的碳原子数为20以下的聚氧乙烯烷基醚、HLB低于15.0且烷基的碳原子数在10以上20以下的聚氧乙烯聚氧化烯烷基醚、HLB低于16.0的聚氧乙烯烷基苯基醚、HLB低于16.0的聚氧乙烯聚氧化烯烷基苯基醚、HLB低于13.0的聚氧乙烯多环苯基醚、HLB低于13.0的聚氧乙烯聚氧化烯多环苯基醚、由下述通式(II)表示的聚氧丙烯的分子量为1200以上且聚氧乙烯的含量为60%以下的聚氧乙烯聚氧丙烯缩合物、以及聚氧乙烯聚氧化烯烷基胺中的表面活性剂，HO‑(C2H4O)d‑(C3H6O)e‑(C2H4O)f‑H      (II)通式(II)中，d、e及f相同或者不同，表示1～200的整数；以及步骤(iii)：使用含有已知浓度的sdLDL‑C的标准样品，进行所述步骤(i)和(ii)，生成过氧化氢或者还原型辅酶，并测定所生成的过氧化氢或者还原型辅酶，将sdLDL‑C浓度与过氧化氢或者还原型辅酶的测定值相关联，来确定该样品中的sdLDL‑C浓度；其中，所述sdLDL‑C表示小而密低密度脂蛋白中的胆固醇。