[发明专利]一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术

摘要

本发明公开了一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术，包括构建融合表达载体pET32a-mCH、构建表达工程菌并发酵培养、融合蛋白TrxA-mCH的纯化、肠激酶处理融合蛋白TrxA-mCH以及目的肽mCH的纯化步骤。本发明方法采用了通过PCR获得的编码斑点叉尾鮰hepcidin成熟肽的天然cDNA构建融合表达载体；在对融合蛋白进行肠激酶处理时，添加适量浓度的二硫苏糖醇（DTT）和尿素，使目的肽在融合蛋白状态下得到正确折叠；本发明应用基因工程技术在原核细胞中高效表达了斑点叉尾鮰hepcidin的成熟肽mCH，产品经抗菌活性测定，对革兰氏阳性和阴性细菌具有明显的抑菌效果，对于绿色饲料添加剂在水产养殖中的使用来说具有重要的实际应用价值。

主权项

一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术，其特征在于，包括以下步骤：（1）通过RT‑PCR获得来自斑点叉尾鮰肝脏的编码hepcidin成熟肽的天然cDNA片段，构建融合表达载体pET32a‑mCH，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达的重组融合蛋白TrxA‑mCH经Ni‑IDA亲和层析，得到纯化；（2）采用肠激酶对纯化的融合蛋白TrxA‑mCH进行处理，以除去融合头，同时通过添加尿素，使目的肽得到正确的折叠；（3）通过分子筛层析对酶切混合液进行分离，得到纯化的目的肽产品mCH。