[发明专利]一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术

权利要求书

1.一种斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的高效表达技术，其特征在于，包括以下步骤：

（1）通过RT-PCR获得来自斑点叉尾鮰肝脏的编码hepcidin成熟肽的天然cDNA片段，构建融合表达载体pET32a-mCH，并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达的重组融合蛋白TrxA-mCH经Ni-IDA亲和层析，得到纯化；

（2）采用肠激酶对纯化的融合蛋白TrxA-mCH进行处理，以除去融合头，同时通过添加尿素，使目的肽得到正确的折叠；

（3）通过分子筛层析对酶切混合液进行分离，得到纯化的目的肽产品mCH。

2.根据权利要求1所述的表达技术，其特征在于，步骤（1）中所述的IPTG诱导表达的温度为30℃。

3.根据权利要求1所述的表达技术，其特征在于，步骤（2）中所述的肠激酶处理的反应体系为：经Ni-IDA亲和层析纯化的融合蛋白TrxA-mCH、肠激酶、25mmol/L Tris-HCl、50mmol/L NaCl、2mmol/L CaCl₂、1mmol/L二硫苏糖醇、终浓度为1mmol/L的尿素；反应温度为25℃，反应时间为16h；肠激酶的用量为每50μg融合蛋白一个酶活单位。