[发明专利]一株产菊粉酶细菌的制备方法

摘要

本发明所属微生物种类开发技术领域。本发明涉及一株产菊粉酶细菌的制备和发酵方法：在滨海盐碱地菊芋生长的根际土壤，加入适量菊粉诱菌20天，取土壤5克于内置50毫升无菌蒸馏水烧杯中，震荡分散20分钟；取稀释液0.2毫升涂布于筛选培养基，30℃培养5天，利用透明圈法初筛出菊粉酶活力较高的菌株，平板划线方法纯化；然后接种于发酵培养基发酵培养6d，提取菌株的总DNA送上海生工生物技术公司测序；将测得的核苷酸序列输入GenBank数据库，进行Blast比对，获取与试验菌16S rDNA基因序列相似度高的菌种，采用ClustalW进行多序列比对得该菌为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)；该菌株产菊粉酶的最佳发酵条件是：菊粉30.0g/L，酵母膏7.0g/L，NaCl5.0，K2HPO4·3H2O3.0g/L，pH6.0，250mL发酵三角瓶装液量为50毫升，在30℃，160r/min振荡培养2天。

主权项

本发明涉及一株产菊粉酶细菌的制备，其特征在产菊粉酶细菌的制备方法，包括以下过程：步骤(一)：在滨海盐碱地菊芋生长的根际土壤，加入适量菊粉诱菌20天；步骤(二)：取步骤(一)土壤5克于内置50毫升无菌蒸馏水烧杯中，160r/min摇床震荡分散20分钟；步骤(三)：取步骤(二)稀释液0.2ml涂布于筛选培养基，30℃培养5天，利用透明圈法初筛出菊粉酶活力较高的菌株，平板划线方法纯化培养，移入斜面保藏；步骤(四)：将步骤(三)纯化后菌种接种于PDA培养基上培养5天，进行复筛；步骤(五)：挑取步骤(四)中的菌株接种于发酵培养基进行发酵培养，30℃、160r/min摇振培养6d，提取菌株的总DNA作为模板，利用通用引物进行PCR反应，纯化；步骤(六)：将步骤(五)纯化后的PCR产物送上海生工生物技术公司测序。将测得的核苷酸序列输入GenBank数据库，进行Blast比对，获取与试验菌16S rDNA基因序列相似度高的菌种。采用ClustalW进行多序列比对得出菌名；步骤(七)：鉴定后的菌种保存备用。