[发明专利]一种快速鉴别文山三七与易混品屏边三七的PCR-RFLP方法

摘要

本发明公开了一种快速鉴别文山三七与易混品屏边三七的PCR-RFLP方法，该方法的PCR扩增采用的引物是由ITS正向引物和反向引物组成，所述的正向引物的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；PCR扩增产物纯化后，分别用限制性内切酶MluC Ⅰ、限制性内切酶Nla Ⅳ酶切，在MluC Ⅰ酶切图谱和NlaⅣ酶切图谱中，文山三七与屏边三七酶切图谱完全不同，可鉴别样品是否为文山三七、是否混入了屏边三七。本发明首次成功建立了文山三七、屏边三七的限制性内切酶酶切图谱，可以准确鉴别文山三七和屏边三七且快速，克服了感官评审难以鉴别文山三七原料的真伪问题。

主权项

一种快速鉴别文山三七与易混品屏边三七的PCR‑RFLP方法，由待鉴别样本的总DNA提取、PCR扩增、PCR扩增产物纯化、酶切反应、琼脂糖凝胶电泳、分析鉴别步骤组成，其特征在于：所述的PCR扩增采用的引物是ITS引物，所述的ITS引物由正向引物和反向引物组成，所述的正向引物的碱基序列如SEQ ID NO：1所示，反向引物的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；PCR扩增产物纯化后，将纯化的PCR扩增产物分成样品1和样品2两等份并均进行酶切反应，样品1中加入限制性内切酶MluC Ⅰ，样品2中加入限制性内切酶NlaⅣ，两个酶切反应产物分别用2%琼脂糖凝胶电泳得MluC Ⅰ酶切图谱和NlaⅣ酶切图谱，对酶切图谱进行分析，在MluC Ⅰ酶切图谱中，如果样品1有三条带，大小分别约为450bp、200bp和100bp，且在NlaⅣ酶切图谱中，如果样品2被切为两条带，大小分别约为500bp和100bp，则待鉴别样本为文山三七；在MluC Ⅰ酶切图谱中，如果样品1只有约450bp的一条带，且在NlaⅣ酶切图谱中，如果样品2不能被NlaⅣ酶切开，其电泳条带与用SEQ ID NO：1所示的正向引物和SEQ ID NO：2所示的反向引物扩增的PCR扩增产物带大小一样，约为750bp，则待鉴别样本为屏边三七。