[发明专利]一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用无效
| 申请号： | 201310085894.4 | 申请日： | 2013-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN103131792A | 公开（公告）日： | 2013-06-05 |
| 发明（设计）人： | 李俊;吴刚;武玉花 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 黄瑞棠 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种Barnase基因定量PCR检测方法及其应用，涉及分子生物学及转基因检测技术领域。本检测方法是：①检索分析Barnase基因序列；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针；③建立标准曲线；④定量体系的精确性验证。本检测方法应用于转基因植物及其产品中Barnase基因的检测。本发明利用发现的序列特征，首次建立Barnase基因特异性定量PCR检测方法；适用于对转基因作物及其衍生品、加工品中Barnase基因的检测、监测和安全管理。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 barnase 基因 定量 pcr 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种Barnase基因定量PCR检测方法，其特征在于：①检索分析Barnase基因序列将NCBI数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中检索的Barnase基因序列(Genbank Accession No. M14442.1)与转基因油菜MS1、MS8中的进行比对，确定了Barnase基因的检测靶标，其序列特征是：SEQ NO.1；②利用该序列特征设计Barnase基因特异性定量PCR检测的引物和探针合成引物序列如下：qBarnaseF：5’AATCAGAAGCACAAGCCCTCG 3’和qBarnaseR：5’AGTTTGCCTTCCCTGTTTGAGAA 3’；合成TaqMan探针序列如下：qBarnaseP：5’FAM－TGTCTCCGCCGATGCTTTTCCCCG－TAMRA 3’；③建立标准曲线提取样品总DNA，分别利用上述引物qBarnaseF/qBarnaseR和探针qBarnaseP组合进行实时荧光定量PCR扩增；转基因油菜MS1基因组DNA被相同浓度非转基因油菜基因组DNA稀释至不同含量，分别以100、20、4、0.8、0.016ng MS1基因组DNA的混和DNA样品，进行荧光定量PCR反应并建立标准曲线；④定量体系的精确性验证以标准曲线为参照测定含有MS1基因组DNA的混和油菜基因组DNA样品中Barnase基因的量。
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