[发明专利]一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法

摘要

本发明是一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，本发明涉及纤维膜表面改性技术：通过化学方法将其表面微观的羟基(OH)结构改变，以醚键(-0-)形式稳定地连接上11氨基十一酸酯(11-AUN)，使其能够作为多肽阵列合成的基膜。也可用于蛋白芯片，抗体芯片的合成。该方法修饰后的纤维素膜解决传统修饰方法易断裂、反应背景高等问题。即使在强酸性条件下，仍能保持膜上多肽稳定，并且能很好降低膜表面对多肽阵列的背景影响。

主权项

一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)用20ml 25％三氟乙酸/二氯甲烷溶液漂洗空白定量滤纸两次，每次20分钟；2)用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次2分钟；3)用20ml 10％三乙基胺/二氯甲烷溶液浸泡、反应上述滤纸两次，每次20分钟，加盖；4)上述反应完毕后，用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次5分钟；5)用20ml四氢呋喃漂洗滤纸两次，每次5分钟；6)分别配制反应液I和反应液II，反应液I为：10ml的N‑(2，3‑环氧丙基)邻苯二甲酰胺溶液，反应液II为：10ml氯化锌的四氢呋喃溶液；将步骤5)得到的滤纸放置反应盒中，加入上述配制的反应液I和反应液II，加盖密封后，震荡反应24小时后得到滤纸膜；7)停止反应并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：i.20ml四氢呋喃，漂洗滤纸膜两次，每次20分钟；ii.20ml二甲基甲酰胺，漂洗滤纸膜三次，每次5分钟；iii.20ml二氯甲烷，漂洗滤纸膜二次，每次2分钟；iv.20ml无水乙醇，漂洗滤纸膜三次，每次2分钟；8)将滤纸膜放置反应盒中，加入肼反应液，加盖密封，震荡反应24小时；9)停止反应，弃去反应液，再重复一次上述步骤8)的反应；10)停止反应，弃去反应液，并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：i.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次5分钟；ii.20ml 10％醋酸/二氯甲烷溶液，3次，每次2分钟；iii.20ml 10％三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液，3次，每次2分钟；iv.20ml二甲基甲酰胺，3次，每次2分钟；v.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次2分钟；vi.将经过上述步骤漂洗过的滤纸膜在空气中干燥得到纤维膜；11)将干燥的改性纤维膜放置在反应盒中，加入0.3M氨基酸反应混合液，加盖，摇摆震荡反应4小时；12)弃去上述反应液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗3次，每次2分钟；13)加入20ml 20％六氢砒啶/二甲基甲酰胺溶液，震荡反应10分钟后，弃去废液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗4次，2分钟/次；再用20ml二氯甲烷漂洗3次，每次2分钟；用风机吹干后，密封在塑料薄膜中保存；所述步骤8)中肼反应液配制方法如下：40ml无水乙醇中加入3ml肼溶液，并在密闭条件下震荡反应24小时；所述步骤11)中0.3M氨基酸反应液配制方法如下：Fmoc‑氨基十一酸/1‑羟基苯并三唑/二异丙基碳二亚胺溶解在15ml二甲基甲酰胺中；密闭震荡反应4小时。