[发明专利]一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法

说明书

技术领域

本发明涉及纤维膜表面改性技术，尤指一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜 的稳定修饰方法。

背景技术

后基因组时代，科学家们已将研究重点由基因组学研究转向功能蛋白质组 学研究。蛋白质组学以研究细胞蛋白质的组成和机构，蛋白-蛋白相互作用以 及他们与疾病发病机理之间的关系为主。高通量的多肽阵列技术是研究蛋白质 与其它生物大分子如其它蛋白质、核酸及多糖之间的相互作用研究中关键且最 好的技术之一。多肽阵列即通过自动化仪器使用化学合成的方法在固相载体上 (玻璃片，纤维素膜，光盘等)同时进行成百上千个多肽的合成，多肽点以阵 列的形式存在与固相载体上，目前多肽阵列广泛用于药物筛选、靶标确认、表 位定位、疫苗开发，以及蛋白相互作用研究。

传统纤维膜表面结构以羟基(OH)组成，该羟基是纤维膜上能够发生化 学反应的活性基团。根据膜上多肽阵列合成要求，膜表面需要进行化学改性， 键合化学惰性的联接物。例如：传统膜化学改性技术是，通过键合上单层或多 层β-Ala，可以降低膜表面对多肽阵列的背景影响。该方法虽然能使β-Ala很 好地与羟基结合生成惰性联接物，覆盖膜表面，减少羟基对多肽阵列的影响。 但缺点是：1)β-Ala是以酯键(-COO-)与膜相连，在做多肽阵列点膜时， 酯键(-COO-)易在强酸性条件下断裂，发生多肽脱落；2)β-Ala分子链较短， 即使键和多层以上，仍不能很好降低膜表面对多肽阵列的背景影响。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种更为稳定的纤维素膜表面修饰方 法，该方法修饰后的纤维素膜解决传统修饰方法易断裂、反应背景高等问题。 通过一系列化学反应，使纤维膜表面结构发生变化，以醚键(-O-)形式稳定 地连接上11氨基十一酸酯(11-AUN)。即使在强酸性条件下，仍能保持膜上 多肽稳定，并且能很好降低膜表面对多肽阵列的背景影响。

本发明首先把氨基端保护的2，3环氧丙胺通过醚键结合到纤维素膜，然 后成功地耦合上联接物11氨基十一酸酯。通过此改性后的纤维素膜适合于固 相的多肽或其他寡聚物合成。

本发明是一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，该方法包括 以下步骤：

1)用20ml 25％三氟乙酸/二氯甲烷溶液漂洗空白定量滤纸两次，每次20 分钟；

2)用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次2分钟；

3)用20ml 10％三乙基胺/二氯甲烷溶液浸泡、反应上述滤纸两次，每次20 分钟，加盖；

4)上述反应完毕后，用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次5分钟；

5)用20ml四氢呋喃漂洗滤纸两次，每次5分钟；

6)分别配制反应液I和反应液II，反应液I为：10ml的N-(2， 3-epoxypropyl)phthalimide溶液，反应液II为：10ml氯化锌的四氢呋喃溶液； 将步骤5)得到的滤纸放置反应盒中，加入上述配制的反应液I和反应液II， 加盖密封后，震荡反应24小时后得到滤纸膜；

7)停止反应并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：

i.20ml四氢呋喃，漂洗滤纸膜两次，每次20分钟；

ii.20ml二甲基甲酰胺，漂洗滤纸膜三次，每次5分钟；

iii.20ml二氯甲烷，漂洗滤纸膜二次，每次2分钟；

iv.20ml无水乙醇，漂洗滤纸膜三次，每次2分钟；

8)将滤纸膜放置反应盒中，加入肼反应液，加盖密封，震荡反应24小时；

9)停止反应，弃去反应液，再重复一次上述步骤8)的反应；

10)停止反应，弃去反应液，并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：

i.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次5分钟；

ii.20ml 10％醋酸/二氯甲烷溶液，3次，每次2分钟；

iii.20ml 10％三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液，3次，每次2分钟；

iv.20ml二甲基甲酰胺，3次，每次2分钟；

v.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次2分钟；

vi.将经过上述步骤漂洗过的滤纸膜在空气中干燥得到纤维膜；

11)将干燥的改性纤维膜放置在反应盒中，加入0.3M氨基酸反应混合液， 加盖，摇摆震荡反应4小时；

12)弃去上述反应液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗3次，每次2分钟；