[发明专利]一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法

权利要求书

1.一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征在于，该方法包括以下 步骤：

1)用20ml 25％三氟乙酸/二氯甲烷溶液漂洗空白定量滤纸两次，每次20分钟；

2)用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次2分钟；

3)用20ml 10％三乙基胺/二氯甲烷溶液浸泡、反应上述滤纸两次，每次20分钟，加 盖；

4)上述反应完毕后，用20ml二氯甲烷漂洗滤纸两次，每次5分钟；

5)用20ml四氢呋喃漂洗滤纸两次，每次5分钟；

6)分别配制反应液I和反应液II，反应液I为：10ml的N-(2，3-环氧丙基)邻苯二 甲酰胺溶液，反应液II为：10ml氯化锌的四氢呋喃溶液；将步骤5)得到的滤纸放置反应 盒中，加入上述配制的反应液I和反应液II，加盖密封后，震荡反应24小时后得到滤纸 膜；

7)停止反应并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：

i.20ml四氢呋喃，漂洗滤纸膜两次，每次20分钟；

ii.20ml二甲基甲酰胺，漂洗滤纸膜三次，每次5分钟；

iii.20ml二氯甲烷，漂洗滤纸膜二次，每次2分钟；

iv.20ml无水乙醇，漂洗滤纸膜三次，每次2分钟；

8)将滤纸膜放置反应盒中，加入肼反应液，加盖密封，震荡反应24小时；

9)停止反应，弃去反应液，再重复一次上述步骤8)的反应；

10)停止反应，弃去反应液，并依次用下述试剂漂洗滤纸膜：

i.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次5分钟；

ii.20ml 10％醋酸/二氯甲烷溶液，3次，每次2分钟；

iii.20ml 10％三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液，3次，每次2分钟；

iv.20ml二甲基甲酰胺，3次，每次2分钟；

v.20ml乙醇/甲醇溶液，3次，每次2分钟；

vi.将经过上述步骤漂洗过的滤纸膜在空气中干燥得到纤维膜；

11)将干燥的改性纤维膜放置在反应盒中，加入0.3M氨基酸反应混合液，加盖，摇摆 震荡反应4小时；

12)弃去上述反应液，用20ml二甲基甲酰胺漂洗3次，每次2分钟；

13)加入20ml 20％六氢砒啶/二甲基甲酰胺溶液，震荡反应10分钟后，弃去废液， 用20ml二甲基甲酰胺漂洗4次，2分钟/次；再用20ml二氯甲烷漂洗3次，每次2分 钟；用风机吹干后，密封在塑料薄膜中保存；

所述步骤8)中肼反应液配制方法如下：40ml无水乙醇中加入3ml肼溶液，并在密闭 条件下震荡反应24小时；

所述步骤11)中0.3M氨基酸反应液配制方法如下：Fmoc-氨基十一酸/1-羟基苯并三 唑/二异丙基碳二亚胺溶解在15ml二甲基甲酰胺中；密闭震荡反应4小时。

2.根据权利要求1所述的一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征 在于，所述步骤1)中空白定量滤纸型号为Whatman50，三氟乙酸/二氯甲烷溶液体积比为 1∶3。

3.根据权利要求1所述的一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征 在于，所述步骤3)中三乙基胺/二氯甲烷溶液体积比为1∶9。

4.根据权利要求1所述的一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征 在于，所述步骤7)中四种溶液洗膜顺序、条件不能颠倒混用。

5.根据权利要求1所述的一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征 在于，所述步骤10)中洗涤溶剂的洗涤顺序、条件不能颠倒混用，乙醇/甲醇溶液体积比 为17∶3，醋酸/二氯甲烷溶液的体积比为1∶9，三乙基胺/二甲基甲酰胺溶液体积比为1∶ 9，乙醇/甲醇溶液体积比为17∶3。

6.根据权利要求1所述的一种用于蛋白芯片合成的纤维素膜的稳定修饰方法，其特征 在于，所述步骤13)中六氢砒啶/二甲基甲酰胺溶液体积比为1∶3；风机使用冷风，将膜 吹干后，密封在塑料薄膜中，在0℃的条件下进行保存。