[发明专利]一种多效复合生防菌剂的制备方法及其应用

摘要

本发明提供一种用于防治物土传病害的多效生防菌剂的制备方法及其应用。采用对作物土传病害病原菌具有拮抗作用的木霉菌株和内生枯草芽胞杆菌为母菌剂，以轻质碳酸钙为载体制成生防菌制剂，该菌剂主要用于防治由镰孢菌、腐霉菌、丝核菌等病原真菌引起的多种作物土传病害，同时具有提高植物自身抗性、增加产量的多重功能。产品生产周期短，防治效果稳定持久，对作物无残留，对环境无污染。

主权项

一种多效复合生防菌剂的制备方法，其特征在于包括如下具体步骤：(1)斜面母菌种的制备：取作物根表土壤10克，加无菌水稀释至1000毫升稀释液，将稀释液与PDA培养基按1∶9的重量比例混合后倒入培养皿内制成平板，26℃下培养48小时，经分离获得木霉菌；纯化后转移至试管斜面内作斜面母菌种；PDA培养基：马铃薯200克、葡萄糖20 克、琼脂20克、孟加拉红0.05克、硫酸链霉素0.03克、水1000毫升；取作物根系10克，用0.1%升汞溶液表面消毒2‑4分钟后，再以无菌水冲洗3‑5次后研碎，加无菌水稀释至1000毫升稀释液，将稀释液与PDA培养基按1∶9的重量比例混合后倒入培养皿内制成平板，26℃下培养48小时，经分离获得内生枯草芽胞杆菌；纯化后转移至试管斜面内作斜面母菌种；PDA培养基：马铃薯200克、葡萄糖20 克、琼脂20克、水1000毫升；(2)二级菌种的制备：二级菌种培养液为红糖20‑30克，酵母2‑5克，调pH值为7‑9，加水至1000毫升。分装在250毫升三角瓶中，装液量为100毫升，在121℃下灭菌30分钟，接入斜面母菌种，摇床转速为150‑200转/分，发酵温度28‑30℃，发酵时间为2‑3天；  (3)液体发酵：制备木霉菌厚垣孢子：培养基配方为：马铃薯150－200克，葡萄糖15－20克，磷酸二氢钾1－2克，硫酸镁1－2克，硫酸钙1－2克，色氨酸3－5克，果糖2－4克，水1000毫升；调pH值为5－6.5，121℃下灭菌30‑40分钟，接菌量为培养基重量的2－4％，发酵温度为23－25℃，搅拌速度为120‑150rpm ，发酵时间3－5天，得到木霉菌厚垣孢子悬浮液；制备枯草芽胞杆菌孢子：培养基配方为：牛肉膏2‑4克g、蛋白胨5‑10克、酵母膏2‑5克、蔗糖10‑20克、磷酸二氢钾1－2克，硫酸镁1－2克、水1000毫升；调PH值为7‑8，121℃下灭菌30‑40分钟，接菌量为培养基重量的2－4％，发酵温度为28‑30℃，搅拌速度为120‑150rpm ，发酵时间3－5天，得到枯草芽胞杆菌孢子悬浮液；(4)生防菌剂的制备：将所得木霉菌厚垣孢悬浮液子按重量比例8‑10％、枯草芽胞杆菌孢子悬浮液按重量比例10‑12％与轻质碳酸钙按重量比例20‑30％和硅藻土按重量比例50－60％充分混合后制成生防制剂。