[发明专利]一种多效复合生防菌剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种多效复合生防菌剂的制备方法，其特征在于包括如下具体步骤：

(1)斜面母菌种的制备：

取作物根表土壤10克，加无菌水稀释至1000毫升稀释液，将稀释液与PDA培养基按1∶9的重量比例混合后倒入培养皿内制成平板，26℃下培养48小时，经分离获得木霉菌；纯化后转移至试管斜面内作斜面母菌种；

PDA培养基：马铃薯200克、葡萄糖20 克、琼脂20克、孟加拉红0.05克、硫酸链霉素0.03克、水1000毫升；

取作物根系10克，用0.1%升汞溶液表面消毒2-4分钟后，再以无菌水冲洗3-5次后研碎，加无菌水稀释至1000毫升稀释液，将稀释液与PDA培养基按1∶9的重量比例混合后倒入培养皿内制成平板，26℃下培养48小时，经分离获得内生枯草芽胞杆菌；纯化后转移至试管斜面内作斜面母菌种；

PDA培养基：马铃薯200克、葡萄糖20 克、琼脂20克、水1000毫升；

(2)二级菌种的制备：

二级菌种培养液为红糖20-30克，酵母2-5克，调pH值为7-9，加水至1000毫升。分装在250毫升三角瓶中，装液量为100毫升，在121℃下灭菌30分钟，接入斜面母菌种，摇床转速为150-200转/分，发酵温度28-30℃，发酵时间为2-3天；  

(3)液体发酵：

制备木霉菌厚垣孢子：

培养基配方为：马铃薯150－200克，葡萄糖15－20克，磷酸二氢钾1－2克，硫酸镁1－2克，硫酸钙1－2克，色氨酸3－5克，果糖2－4克，水1000毫升；调pH值为5－6.5，121℃下灭菌30-40分钟，接菌量为培养基重量的2－4％，发酵温度为23－25℃，搅拌速度为120-150rpm ，发酵时间3－5天，得到木霉菌厚垣孢子悬浮液；

制备枯草芽胞杆菌孢子：

培养基配方为：牛肉膏2-4克g、蛋白胨5-10克、酵母膏2-5克、蔗糖10-20克、磷酸二氢钾1－2克，硫酸镁1－2克、水1000毫升；调PH值为7-8，121℃下灭菌30-40分钟，接菌量为培养基重量的2－4％，发酵温度为28-30℃，搅拌速度为120-150rpm ，发酵时间3－5天，得到枯草芽胞杆菌孢子悬浮液；

(4)生防菌剂的制备：将所得木霉菌厚垣孢悬浮液子按重量比例8-10％、枯草芽胞杆菌孢子悬浮液按重量比例10-12％与轻质碳酸钙按重量比例20-30％和硅藻土按重量比例50－60％充分混合后制成生防制剂。 

2.一种如权利要求1所述的多效复合生防菌剂的应用，其特征在于：将多效复合菌剂按重量比例100-300倍采用床面拌土或穴施或灌根的方法防治作物土传病害。