[发明专利]一种固定化纳豆菌发酵木豆种子的方法

摘要

本发明涉及一种固定化纳豆菌发酵木豆种子的方法，并具体公开了其操作步骤，如下：首先分别采用吸附法、包埋法和交联法固定化纳豆菌，并通过液体培养发酵木豆种子制备成纳豆激酶和木豆种子发酵体系，然后选择最优的固定化方法并对其固载基质和发酵工艺条件进行优化和筛选，使用优化后的固定化菌球液体培养发酵木豆种子，最后得到富含纳豆激酶的发酵液和发酵木豆种子粉末。该发明不但能制备出具有溶血栓功效的保健功能食品，而且固定化后的纳豆菌易于分离，避免了人体直接摄入纳豆菌，同时固定化的菌球还可以重复使用，降低了发酵成本，实现了环保节能的生产方式，因此本发明具有广阔的市场前景和食品工业化生产应用价值。

主权项

本发明涉及一种固定化纳豆菌发酵木豆种子的方法，其特征在于具体步骤如下：(1)纳豆菌固定化基材的选择：分别采用活性炭、硅胶等为基材的物理吸附法，DEAE‑纤维素、DEAE‑葡聚糖凝胶、CM‑纤维素等为基材的离子结合法，海藻酸钙、聚乙烯醇、明胶等为基材的凝胶包埋法和戊二醛交联法固定化纳豆菌；(2)液体培养基的制备：将粉碎后的木豆种子加入到蒸馏水中浸泡一夜，调整pH，高温高压灭菌后，恢复到室温备用；(3)固定化纳豆菌的发酵：将纳豆菌菌液与海藻酸钠溶液混合后滴入到氯化钙溶液当中，静置1.0~2.0h，将形成的菌球冲洗干净，投入到木豆种子液体培养基中进行发酵；(4)菌球的分离：发酵结束后，在无菌条件下取出固定化菌球，灭菌水浸泡1.0~2.0h，冲洗后投入到新的木豆种子液体培养基中继续发酵；(5)纳木豆粉和纳木豆发酵液的制备：将固定化菌球分离，并对发酵好的纳豆激酶和木豆种子体系进行抽滤，得到富含纳豆激酶的发酵液和发酵木豆种子膏体，将膏体冻干、粉碎并过筛，制成发酵木豆种子粉末；(6)发酵液和粉末溶栓活力的测定：取富含纳豆激酶的发酵液和发酵木豆种子粉末生理盐水浸泡液，用纤维蛋白平板法分别测定他们的溶栓活力，计算激酶的活力值。