[发明专利]一种油菜单粒种子基因组DNA高通量快捷提取方法

摘要

本发明提供一种油菜单粒种子基因组DNA高通量快捷提取方法，属于生物技术领域。该方法包括：发芽；取材；裂解；提取；沉淀；离心；干燥；溶解；保存等步骤，用PCR仪代替水浴，提取全程使用96孔PCR板，配合多通道移液器操作。用本发明方法提取油菜种子基因组DNA时间短、陈本低、操作简便、高通量、后续DNA吸取方便，提取的DNA产量和质量完全满足PCR反应的需要。

主权项

一种油菜单粒种子基因组DNA高通量快捷提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1) 发芽：在培养皿内铺滤纸，加水至完全湿润滤纸，将油菜种子均匀撒在滤纸上，盖上培养皿盖，放入培养箱中，37℃暗培养12‑16小时至根长3‑5mm；(2) 取材：将破皮萌发的油菜种子去种皮，放入0.2mL 96孔PCR板，每孔一粒；(3) 裂解：每孔加20μL 0.25mol/L NaOH，在PCR仪上99.9℃ 1min；(4) 提取：每孔加5μL 1mol/L HCl中和，再加入25μL 0.5mol/L Tris‑HCl(pH8.0)，在PCR仪上99.9℃ 3min；(5) 沉淀：待PCR板自然冷却，用镊子取出提取液中油菜种子，加入100μL 预冷无水乙醇，盖上PCR板封口膜，上下摇匀20次；(6) 离心：板式离心机离心PCR板，3000rpm，10min，弃上清；(7) 干燥：将PCR板置入真空干燥仪，35℃真空干燥5min；(8) 溶解：每管加入50μL灭菌ddH2O，37℃完全溶解DNA，4℃保存。