[发明专利]一种油菜单粒种子基因组DNA高通量快捷提取方法无效
| 申请号： | 201310044228.6 | 申请日： | 2013-02-05 |
| 公开（公告）号： | CN103060311A | 公开（公告）日： | 2013-04-24 |
| 发明（设计）人： | 陈锋;张洁夫;戚存扣;陈松;浦慧明;付三雄 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 张素卿 |
| 地址： | 210014*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 油菜 种子 基因组 dna 通量 快捷 提取 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种油菜单粒种子基因组DNA高通量快捷提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 发芽：在培养皿内铺滤纸，加水至完全湿润滤纸，将油菜种子均匀撒在滤纸上，盖上培养皿盖，放入培养箱中，37℃暗培养12-16小时至根长3-5mm；
(2) 取材：将破皮萌发的油菜种子去种皮，放入0.2mL 96孔PCR板，每孔一粒；
(3) 裂解：每孔加20μL 0.25mol/L NaOH，在PCR仪上99.9℃ 1min；
(4) 提取：每孔加5μL 1mol/L HCl中和，再加入25μL 0.5mol/L Tris-HCl(pH8.0)，在PCR仪上99.9℃ 3min；
(5) 沉淀：待PCR板自然冷却，用镊子取出提取液中油菜种子，加入100μL 预冷无水乙醇，盖上PCR板封口膜，上下摇匀20次；
(6) 离心：板式离心机离心PCR板，3000rpm，10min，弃上清；
(7) 干燥：将PCR板置入真空干燥仪，35℃真空干燥5min；
(8) 溶解：每管加入50μL灭菌ddH2O，37℃完全溶解DNA，4℃保存。
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