[发明专利]一种用于微生物燃料电池的产电基因工程菌及其构建方法和应用无效
| 申请号： | 201310034108.8 | 申请日： | 2013-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN103215301A | 公开（公告）日： | 2013-07-24 |
| 发明（设计）人： | 陈怡露;郑涛;冯娇;雍晓雨;许琳;曹琳;沈海波;费文斌 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/78 | 分类号： | C12N15/78;C12N1/21;H01M4/90;C12R1/385 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于生物工程技术领域，涉及微生物燃料电池产电基因工程菌的构建、菌株及其应用。通过分子生物学手段在铜绿假单胞菌PAO1中异源表达大肠杆菌中NAD+从头合成途径与回补途径中共同的关键基因nadE，获得产电量高的基因工程菌株铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）PA-nadE，应用于微生物燃料电池领域的发展，并且为产电铜绿假单胞菌的基因工程研究奠定了良好的基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 微生物 燃料电池 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种产电基因工程菌菌株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：1）以大肠杆菌基因组DNA为模板，纯化扩增出nadE基因，经T‑A克隆插入到T载体pMD19‑T Simple相应的位点之间、经测序，比对正确，获得中间重组质粒pMD19‑T‑nadE；2）以中间重组质粒pMD19‑T‑nadE为模板，纯化扩增出nadE基因，插入到表达质粒pBBR1MCS‑5相应的酶切位点之间、连接获得重组质粒pBBR1MCS‑nadE；3）将构建重组质粒pBBR1MCS‑nadE经电击转化导入出发菌铜绿假单胞菌PAO1的感受态，经50 μg/mL的庆大霉素筛选得到的阳性转化子即为产电基因工程菌。
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