[发明专利]一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法

摘要

本发明涉及基因工程及发酵工程领域，具体公开了一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法。该方法是利用基因工程技术构建能分别分泌表达内切葡聚糖酶EG、外切葡聚糖酶CBH和β-葡萄糖苷酶BGL的三种基因重组酿酒酵母菌株，然后将上述三种基因重组酵母菌株混合培养，并以纤维素原料为唯一碳源发酵，可较高效地将纤维素直接转化为乙醇。本发明方法将产酶、纤维素水解和乙醇发酵在一个体系中完成，不需额外添加纤维素酶，可在发酵过程中直接分解纤维素并转化为乙醇，省略了糖化步骤，简化了操作，节省了成本，是一套绿色环保低碳的纤维素乙醇生产工艺。

主权项

一种利用基因重组酵母混合培养将纤维素转化为乙醇的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.种子液的制备：首选分别构建能分泌表达内切葡聚糖酶EG的菌株AS2.489‑PS‑EG、能分泌表达外切葡聚糖酶CBH的菌株AS2.489‑PS‑CBH和能分泌表达β‑葡萄糖苷酶BGL的菌株AS2.489‑PS‑BGL；然后活化培养各菌株至对数生长期，并使各菌株的酵母细胞数达到0.8~1亿/mL，即为成熟种子液；S2.配制发酵培养基并灭菌，所述培养基含有如下重量份的组分：100~200份蔗渣，20~40份玉米浆，10~30份葡萄糖，5~15份硫酸铵，1~10份磷酸二氢钾；S3.接种：将AS2.489‑PS‑EG、AS2.489‑PS‑CBH和AS2.489‑PS‑BGL的成熟种子液混合后，于无菌条件下接种，总接种量为培养基体积的8~15%；S4. 发酵：前酵期通入无菌空气，控制温度为28~32°C，搅拌速度为150~250转/分钟，搅拌培养3~5小时,前酵期结束;然后进入主酵期厌氧发酵阶段,主酵期保持温度为28~32°C，停止通气并保持50~100转/分钟的缓慢搅拌，发酵2~4天；整个发酵过程中控制pH为3.5~4.5。