[发明专利]草莓潜隐环斑病毒的RT-LAMP检测方法

摘要

本发明公开了草莓潜隐环斑病毒的RT-LAMP检测方法，通过样品RNA提取，RT-LAMP扩增，就可以得到检测结果，整个检测反应不超过2.5h，又由于LAMP呈瀑布式扩增，因此其扩增效率非常高，灵敏度是RT-PCR检测的100倍，且无需复杂的检测仪器和检测过程，操作简单，可现场实时检测，因此本发明是一种检测速度快、操作简单、检测结果判断容易和灵敏度高的草莓潜隐环斑病毒的RT-LAMP检测方法。

主权项

草莓潜隐环斑病毒的RT‑LAMP检测方法，其特征在于步骤如下：a、总RNA提取：检测样品经液氮处理后研碎成粉末状，用Trizol核酸提取试剂提取总RNA，得到样品总RNA；具体提取方法依Trizol核酸提取试剂的说明书进行；b、RT‑LAMP扩增：20μL RT‑LAMP扩增反应体系为2×反应缓冲液10μL，浓度5 U/μL 的Bst DNA聚合酶1.5μL，浓度5 U/μL 的AMV RNA聚合酶1μL，样品总RNA1μL，引物F3、B3、Loop1、Loop2、FIP和BIP，余量为ddH2O，该扩增反应体系中，引物F3和B3的终浓度各为0.2μM，引物Loop1和Loop2的终浓度各为0.8μM，引物FIP和BIP的终浓度各为1.6μM，其中引物F3的核苷酸序列为gagaatcacc  gttactggaa agg，引物B3的核苷酸序列为acagcaaaca gagaaccact acc，引物Loop1的核苷酸序列为gcaaagccca tttccacagt，引物Loop2的核苷酸序列为ggttgctacg tgccaaggtt，引物FIP的核苷酸序列为cgataggcat cgctctccct ttttagaggt gatctttaac ctccc，引物BIP的核苷酸序列为tactttggtt cgacagtggt ggattttccc attagataac caccataacc a，反应条件为60～65℃的恒温水浴锅中扩增1～1.5 h，得到扩增产物； c、在扩增产物中加入0.1μL的荧光染料SYBR green I，若呈绿色则样品中感染有草莓潜隐环斑病毒，若呈橙红色则样品中无草莓潜隐环斑病毒。