[发明专利]将靶向肽偶联于重组溶酶体酶上的方法

摘要

本申请描述了制备与重组溶酶体酶偶联的靶向肽的方法，其通过使用第一交联剂修饰重组人溶酶体酶的氨基(N)‑末端和一个或多个赖氨酸残基以产生第一交联剂修饰的重组人溶酶体酶，使用第二交联剂修饰变体IGF‑2肽的氨基(N)‑末端的短延长接头的第一个氨基酸以产生第二交联剂修饰的变体IGF‑2肽，然后将所述第一交联剂修饰的重组人溶酶体酶与所述含有短延长接头的第二交联剂修饰的变体IGF‑2肽偶联。本申请还描述了使用本申请所公开的方法合成的偶联物，所述偶联物的特征为与IGF2/CI‑MPR受体具有更高的亲和性和能够被细胞摄取。本申请还描述了使用所公开的偶联物的治疗方法。

主权项

1.一种与重组人溶酶体酶偶联的靶向肽的制备方法，所述方法包括：使用第一交联剂修饰重组人溶酶体酶的氨基(N)-末端和一个或多个赖氨酸残基以产生第一交联剂修饰的重组人溶酶体酶，其中：所述重组人溶酶体酶选自由以下组成的组：人酸性α-葡糖苷酶(rhGAA)、人酸性α-半乳糖苷酶A(GLA)、人酸性β-葡糖醛酸酶(GUS)、人酸性α-透明质酸酶A(IduA)、人酸性艾杜糖酸2-硫酸酯酶(I2S)、人β-氨基己糖苷酶A(HexA)、人β-氨基己糖苷酶B(HexB)、人酸性α-甘露糖苷酶A、人β-葡糖脑苷酶(GlcCerase)、人酸性脂肪酶(LPA)、及其任意组合；和所述第一交联剂选自琥珀酰亚胺6-肼基烟酸酯丙酮(S-Hynic)、琥珀酰亚胺4-盐酸酰肼基对苯二酸(SHTH)、琥珀酰亚胺4-盐酸酰肼烟酸(SHNH)、N-羟基琥珀酰亚胺酯-(PEG)n-酰肼、N-羟基琥珀酰亚胺酯-膦(NHS-膦)、硫代-N-羟基琥珀酰亚胺酯-膦(硫代-NHS-膦)、N-羟基琥珀酰亚胺酯-四氧杂十五烷乙炔(NHS-PEG4-乙炔)、N-羟基琥珀酰亚胺酯-(PEG)n-乙炔、或者NHS-PEG3-S-S-乙炔，其中n＝3-24；使用第二交联剂修饰在变体IGF-2肽的短延长接头的氨基(N)-末端的第一个氨基酸以产生第二交联剂修饰的变体IGF-2肽，其中：所述变体IGF-2肽由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列表示；所述短延长接头由SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列表示；和所述第二交联剂选自PEG4-戊氟苯基苯甲酸酯(PEG4-PFB)、琥珀酰亚胺4-甲酰基苯甲酸酯(SFB)、C6-琥珀酰亚胺4-甲酰基苯甲酸酯(C6-SFB)、N-羟基琥珀酰亚胺酯-叠氮化物(NHS-叠氮化物)、N-羟基琥珀酰亚胺酯-(PEG)n-叠氮化物、或者NHS-PEG3-S-S-叠氮化物，其中n＝3-24；和将所述第一交联剂修饰的重组人溶酶体酶与所述包含短延长接头的第二交联剂修饰的变体IGF-2肽偶联。