[发明专利]一种固料培养裂殖壶菌液体发酵生产DHA的方法

摘要

一种固料培养裂殖壶菌液体发酵生产DHA的方法，涉及发酵生产DHA的方法。采用的菌种为裂殖壶菌（Schizochytrium sp.）KDW-12。菌种活化与菌悬液制备；一级种子制备；二级固料种子的制备；二级固料种子发酵罐扩大培养；发酵结束后，收集菌体细胞，提取DHA油脂。提取的DHA可作为营养强化剂，为人类和动物提供所需长链多不饱和脂肪酸。改进种子制备方式，简化扩种工艺，缩短种子培养和发酵周期，可减少投资，节约成本；同时固料培养基营养丰富，富含多种生长因子，更利于种子的生长，菌种细胞的生长活力强、同步性较好；培养固料种子阶段产生的废水、废渣少，环境污染小。

主权项

一种固料培养裂殖壶菌液体发酵生产DHA的方法，其特征在于包括如下步骤：1）菌种活化与菌悬液制备：将裂殖壶菌（Schizochytrium sp.）KDW‑12菌种接种于斜面培养基上培养活化，培养到期斜面加入质量百分数为0.85%的生理盐水洗涤菌体，获得菌悬液；所述裂殖壶菌（Schizochytrium sp.）KDW‑12，已于2012年11月20日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.6843；2）一级种子制备：将步骤1）获得的菌悬液按质量分数为1%的接种量接种至固料培养基上培养，制成一级固料种子；或将步骤1）获得的菌悬液按质量分数为1%的接种量接种至液体种子培养基，摇瓶培养，制成一级液体种子；3）二级固料种子的制备：一级固料种子以质量百分数为0.85%的生理盐水根据1:1(W/V)比例洗涤菌体，制成菌悬液；在无菌条件下：按质量分数为10%～20%的接种量在固料培养基中接入一级固料种子液；或按质量分数为8%～15%的接种量在固料培养基中接入一级液体种子，摇动K瓶混合均匀，25～28℃，培养2～3天；制得二级固料种子；4）二级固料种子发酵罐扩大培养：二级固料种子加入1:3～5（W/V）无菌水振荡洗下菌体，按质量分数为10%～20%的接种量接种至发酵罐扩大培养，发酵前48h温度控制在25～28℃，利用搅拌转速保持30%～50%的溶氧，48h至发酵结束温度控制在18～22℃，发酵3～5天，通过重量百分比为28%的氨水控制发酵pH6.0～6.5，整个发酵过程自动流加经118℃灭菌25min的浓度为580g/L的葡萄糖溶液控制发酵葡萄糖浓度在4～8g/L；5）发酵结束后，收集菌体细胞，提取DHA油脂。