[发明专利]新型腈水合酶

摘要

本发明的目的为提供一种具有新型突变位点的腈水合酶的氨基酸序列及其基因的碱基序列，另外本发明的目的还在于提供一种对具有腈水合酶活性的酶进行修饰的方法。作为解决目前问题的方法，提供了在来源于嗜热假诺卡氏菌JCM3095、由2种异源亚单位构成的腈水合酶中引入新型突变而得到的突变体的氨基酸序列及其基因的碱基序列。而且，通过确定腈水合酶的立体结构/氨基酸序列中作为修饰对象的区域，并对与形成所述区域的氨基酸残基对应的氨基酸序列中的氨基酸进行置换、插入、缺失等改变从而修饰腈水合酶。通过本发明，能够比现有技术更高效率地将腈化合物转化为对应的酰胺化合物。

主权项

一种腈水合酶突变体，是具有由序列表1的序列号1的氨基酸序列构成的α亚单位及由序列表1的序列号2的氨基酸序列构成的β亚单位的腈水合酶的至少一个以上的氨基酸置换为其它氨基酸而得到的腈水合酶突变体，其中所述腈水合酶具有形成参与2聚体形成的α亚单位和β亚单位之间的结合界面、或参与2聚体之间结合的界面的区域，所述腈水合酶突变体包含下述突变，所述突变是选自由位于所述腈水合酶中所述结合界面或形成所述界面的区域中的、所述序列号1的氨基酸序列的第71、148、188及204位的氨基酸及所述序列号2的氨基酸序列的第10、146、150、160、168、171、176、186、217及218位氨基酸构成的组中的任一氨基酸置换为下述(i)～(xv)所示的其它氨基酸而得到的突变，(i)所述序列号1的氨基酸序列的第71位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为His，(ii)所述序列号1的氨基酸序列的第148位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Asp，(iii)所述序列号1的氨基酸序列的第188位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gly，(iv)所述序列号1的氨基酸序列的第204位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Arg、Lys、Trp或Thr，(v)所述序列号2的氨基酸序列的第10位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Asp、Glu、Trp、Gly、Tyr或Cys，(vi)所述序列号2的氨基酸序列的第146位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gly，(vii)所述序列号2的氨基酸序列的第150位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ser或Asn，(viii)所述序列号2的氨基酸序列的第160位氨基酸置换为其 它氨基酸时，置换为Leu、Trp、Met或Cys，(ix)所述序列号2的氨基酸序列的第168位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Glu，(x)所述序列号2的氨基酸序列的第171位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ala，(xi)所述序列号2的氨基酸序列的第176位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Ala、Met、Cys或Thr，(xii)所述序列号2的氨基酸序列的第186位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Glu、Asp、Lys、Arg、Asn、Ser或Gly，(xiii)所述序列号2的氨基酸序列的第217位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Gly、Val、Leu、Met、Cys、Ser、Thr或His，(xiv)所述序列号2的氨基酸序列的第218位氨基酸置换为其它氨基酸时，置换为Met或Ser。