[发明专利]一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法

摘要

本发明公开了一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法。使用的目的菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期:2011年2月25日，保藏编号:CCTCC NO:M2011050，分类命名: 棒杆菌GLHZB21，即Corynebacterium sp.GLHZB21，目的菌株经发酵和培养后，加入剑麻废料中，经发酵、离心，取得上清液，在真空干燥箱中去水烘干，即提取到剑麻皂苷。本发明利用微生物发酵可明显提高皂苷产率，与现在流行的酸碱化学提取方法相比产率可提高30%左右，且该微生物具有安全环保、成本低、降解速度快、降解率高等特点，因此该内容可以用于传统的皂苷工业生产中，取代目前的酸碱化学提取工艺方法。

主权项

一种利用微生物发酵提高剑麻皂苷产率的方法，其特征在于具体步骤为：(1)制备培养基：a.称取去皮土豆100‑250克，并将土豆切成方块，加0.5‑2.0升水后加热煮沸20‑40分钟，之后冷却至室温，用四层纱布过滤，所得滤液定容至0.5‑2.0升，备用；b.取步骤(1)第a步所制得的备用滤液0.05‑1.5升置于三角瓶中，再向三角瓶内加入1.0‑2.0克的琼脂粉，用牛皮纸包扎三角瓶口，在1.103MPa、121℃条件下灭菌20分钟，然后将三角瓶内产物迅速地倒入直径为9厘米的培养皿内，加盖，待琼脂凝固后，即制得固体培养基，备用；c.将步骤(1)第a步所制得的备用滤液中剩余的滤液0.5‑1.95升移至1.0‑2.5升容器内，用牛皮纸包扎瓶口，在1.103MPa、121℃的条件下灭菌20分钟，制得液体发酵培养基，备用；(2)目的菌株的平面培养和发酵培养：在无菌条件下，将斜面保存的目的菌株涂布在步骤(1)第b步制得的固体培养基上，20‑35℃下培养36小时，然后取出菌株，接种到50‑200毫升步骤(1)第c步制得的液体发酵培养基中，在28‑36℃下以100‑300转/分钟的速度摇床振荡发酵培养72小时，制得发酵液；所述目的菌株微生物现保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期:2011年2月25日，保藏编号:CCTCC NO:M2011050，分类命名: 棒杆菌GLHZB21即Corynebacterium sp.GLHZB21；(3)剑麻废料中剑麻皂苷的提取：取步骤(2)制得的发酵液30毫升置于离心管中，4000‑6000 转/分钟的转速离心20分钟，弃上清液，剩余部分加入到100毫升无菌水中稀释，稀释后的菌液中加入5‑20克剑麻废料，在摇床上以200转/分钟的振荡速度发酵24小时后，取发酵液5毫升，以4000‑6000 转/分钟的转速离心15分钟，取上清液，在真空干燥箱中去水烘干，即提取到剑麻皂苷。