[发明专利]一种利用离体叶片鉴定番茄黄化曲叶病毒抗性的方法

摘要

本发明公开了一种利用离体叶片鉴定番茄黄化曲叶病毒抗性的方法，包括侵染性克隆菌液的培养，菌液的收集，叶片处理离体叶片接种等步骤。本发明主要利用天津地区TYLCV的侵染性克隆，通过离体叶片接种番茄黄化曲叶病毒，鉴定不同番茄材料对该病毒的抗性。此方法无需饲养烟粉虱、操作简单、效率高、重复性好、可控性好，能提供相对一致的接种压力，结果准确，是一种简便有效的接种鉴定方法。通过该方法能科学高效准确地鉴定出番茄对TYLCV的抗性。

主权项

1.一种利用离体叶片鉴定番茄黄化曲叶病毒抗性的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）侵染性克隆菌液的培养：将含有病毒DNA-A侵染性克隆的农杆菌LBA4404接种在含50 ug/mL Kan和50 ug/mL Rif的YEB液体培养基中，28℃，200 rpm振荡培养48 h；（2）菌液的收集：用5000rpm离心机离心收集菌体，用液体MS培养基重新悬浮菌体，调OD600值为0.5；其中所述的MS培养基配方如下：含100uM乙酰丁香酮；（3）叶片处理：取5-6片苗龄的番茄叶片，在无菌操作台上用75%（V/V）的酒精表面消毒30 s，再用0.1%升汞（升汞即氯化汞）消毒3.5 min，无菌水冲洗5~6次，将叶片剪成1cm×2 cm大小的叶片块；（4）离体叶片接种：将剪好的长方形叶片块置于含有侵染性克隆的农杆菌LBA4404中浸泡20min后，接种到MS培养基（含100uM乙酰丁香酮）上，25℃共培养2-3天，然后将叶片用灭菌水清洗3遍，再转移到含有浓度为500mg/l头孢霉素的MS固体培养基上，7天后进行观察和测量；所述的用灭菌水为内含有500mg/l头孢霉素的水。