[发明专利]一种固定化酶及制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化酶的制备方法，步骤为：(1)将聚乙烯醇加入水中，搅拌下，加入APTES，再滴加盐酸水溶液，搅拌，得到改性聚乙烯醇的溶液；(2)将改性聚乙烯醇溶液与壳聚糖溶液混合，搅拌，抽真空除去溶液中的气泡，得到均相的混合液，滴于氢氧化钠溶液中，固化，用蒸馏水洗至中性，过滤，得到复合小球载体；(3)将复合小球载体置于戊二醛-缓冲液溶液中，震荡活化得到活化后的载体小球；(4)将活化后的载体小球置于酶-缓冲液溶液中，震荡，得到的固定化酶小球；本发明的方法制备的固定化酶酶活高，热稳定性、重复使用性很好。在重复使用9次后，还能够保留80%以上的初始酶活。而且固定化酶颗粒直径有3-4mm，便于分离。

主权项

一种固定化酶的制备方法，其特征是包括如下步骤：(1)按比例将10g平均聚合度为1750±50的聚乙烯醇加入100‑150mL水中，搅拌下加热至75‑85℃，保温1.5‑2.5h，加入1‑5mL 3‑氨丙基三乙氧基硅烷，再滴加1‑2mL、浓度为1mol/L盐酸水溶液，搅拌0.5‑2.5h，得到改性聚乙烯醇的溶液；(2)按比例将50mL所述改性聚乙烯醇溶液与50‑250mL壳聚糖溶液混合，搅拌1‑2h，抽真空除去溶液中的气泡，得到均相的混合液，将30mL所述均相混合液滴于100‑150mL氢氧化钠溶液中，固化1‑3h，用蒸馏水洗至中性，过滤，得到复合小球载体；所述壳聚糖溶液是用下述方法制成：将1‑4g脱乙酰度≥85%的壳聚糖加入100mL水中，在搅拌下加入1‑3mL冰醋酸，继续搅拌2‑3h，得到壳聚糖溶液；所述氢氧化钠溶液是用下述方法制成：将6‑12g氢氧化钠溶解于100mL水中，再加入20mL乙醇混合均匀；(3)按比例将4g所述复合小球载体置于20‑50mL、质量浓度为1%‑5%的戊二醛‑缓冲液溶液中，震荡活化1‑5h，用缓冲液洗3‑5次，除去未反应的戊二醛，得到活化后的载体小球；(4)按比例将4g所述活化后的载体小球置于10‑50mL、浓度为0.25‑1.25mg/mL的酶‑缓冲液溶液中，震荡10‑20h，用缓冲液洗3‑5次，除去未交联的酶，得到的固定化酶小球真空冻干；所述缓冲液为pH=7.0的磷酸盐缓冲液。