[发明专利]一种固定化酶及制备方法

权利要求书

1.一种固定化酶的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)按比例将10g平均聚合度为1750±50的聚乙烯醇加入100-150mL水中，搅拌下加热至75-85℃，保温1.5-2.5h，加入1-5mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，再滴加1-2mL、浓度为1mol/L盐酸水溶液，搅拌0.5-2.5h，得到改性聚乙烯醇的溶液；

(2)按比例将50mL所述改性聚乙烯醇溶液与50-250mL壳聚糖溶液混合，搅拌1-2h，抽真空除去溶液中的气泡，得到均相的混合液，将30mL所述均相混合液滴于100-150mL氢氧化钠溶液中，固化1-3h，用蒸馏水洗至中性，过滤，得到复合小球载体；

所述壳聚糖溶液是用下述方法制成：将1-4g脱乙酰度≥85%的壳聚糖加入100mL水中，在搅拌下加入1-3mL冰醋酸，继续搅拌2-3h，得到壳聚糖溶液；

所述氢氧化钠溶液是用下述方法制成：将6-12g氢氧化钠溶解于100mL水中，再加入20mL乙醇混合均匀；

(3)按比例将4g所述复合小球载体置于20-50mL、质量浓度为1%-5%的戊二醛-缓冲液溶液中，震荡活化1-5h，用缓冲液洗3-5次，除去未反应的戊二醛，得到活化后的载体小球；

(4)按比例将4g所述活化后的载体小球置于10-50mL、浓度为0.25-1.25mg/mL的酶-缓冲液溶液中，震荡10-20h，用缓冲液洗3-5次，除去未交联的酶，得到的固定化酶小球真空冻干；

所述缓冲液为pH=7.0的磷酸盐缓冲液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤（1）为：按比例将10g平均聚合度为1750±50的聚乙烯醇加入125mL水中，搅拌下加热至80℃，保温2h，加入3mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，再滴加1.5mL、浓度为1mol/L盐酸水溶液，搅拌1.5h，得到改性聚乙烯醇的溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤（2）为：按比例将50mL所述改性聚乙烯醇溶液与150mL壳聚糖溶液混合，搅拌1.5h，抽真空除去溶液中的气泡，得到均相的混合液，将30mL所述均相混合液滴于125mL氢氧化钠溶液中，固化2h，用蒸馏水洗至中性，过滤，得到复合小球载体；

所述壳聚糖溶液是用下述方法制成：将3g脱乙酰度≥85%的壳聚糖加入100mL水，在搅拌下加入2mL冰醋酸，继续搅拌2.5h，得到壳聚糖溶液；

所述氢氧化钠溶液是用下述方法制成：将9g氢氧化钠溶解于100mL水中，再加入20mL乙醇，混合均匀。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤（3）为：按比例将4g所述复合小球载体置于35mL、质量浓度为3%的戊二醛-缓冲液溶液中，震荡活化3h，用缓冲液洗4次，除去未反应的戊二醛，得到活化后的载体小球。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述步骤（4）为：按比例将4g所述活化后的载体小球置于30mL、浓度为0.75mg/mL的酶-缓冲液溶液中，震荡10h，用缓冲液洗4次，除去未交联的酶，得到的固定化酶小球真空冻干；

所述缓冲液为pH=7.0的磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征是所述酶为过氧化氢酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶或糖化酶。

7.权利要求1-6之一的方法制备的固定化酶。