[发明专利]对多个混合DNA或RNA序列进行基因测序的方法及装置

摘要

本发明公开了一种对多个混合的DNA或RNA序列进行基因测序的方法及装置，主要是在建库前给每个DNA或RNA模版序列两端加入随机标签。方法包括：将含有随机标签和接头的第一上游引物与第一下游引物和DNA序列混合，进行两个PCR循环的多重PCR扩增，纯化该PCR产物，获得第一DNA产物；将第一DNA产物与含有样品索引序列和接头的第二上游引物和第二下游引物混合，进行PCR反应，获得第二PCR产物；纯化后获得第二DNA产物；对第二DNA产物进行测序，获得每个DNA序列的测序结果。本发明通过引入随机标签到每个DNA分子，能够提高测序的准确性，显著减少测序的错误率，且准确测定每种DNA的拷贝数。

主权项

一种对多个混合的DNA序列进行基因测序的方法，其特征在于，包括：将M对第一上游引物序列与第一下游引物序列和免疫细胞群中T淋巴细胞受体TCR和/或B淋巴细胞受体BCR的N个DNA序列的溶液混合，并进行两个循环的PCR反应，获得第一PCR产物，其中，所述M和N是自然数，M大于或等于一百倍的N，所述第一上游引物序列或第一下游引物序列从5’端到3’端依次包含接头序列、标签序列以及第一上游基础引物序列或第一下游基础引物序列，每对第一上游引物序列与第一下游引物序列的标签序列使得每个DNA序列经过PCR反应后具有不同于其它DNA序列的标签序列，所述接头序列是使每个DNA序列同等地进行PCR反应的序列，所述第一上游基础引物序列与第一下游基础引物序列分别与所述DNA序列两条单链的3’末端互补；对所述第一PCR产物进行分离纯化，获得第一DNA产物，所述第一DNA产物的每条单链的两端均包含所述第一上游引物序列与第一下游引物序列的互补序列，或包含所述第一上游引物序列的互补序列与第一下游引物序列；将所述获得的第一DNA产物与第二上游引物序列和第二下游引物序列的溶液混合，并进行二十五至四十个循环的PCR反应，获得第二PCR产物，其中，所述第二上游引物序列包含所述第一上游引物序列中的接头序列，所述第二下游引物序列包含所述第一下游引物序列中的接头序列；对所述第二PCR产物进行分离纯化，获得第二DNA产物；对所述第二DNA产物进行基因测序，并分析测序结果，获得每个DNA序列的测序结果。