[发明专利]一种3’-cDNA展示方法无效
| 申请号： | 201210382040.8 | 申请日： | 2012-10-10 |
| 公开（公告）号： | CN102994632A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 贾定洪;郑林用;彭卫红;甘炳成;黄忠乾;谭伟;王波;谢丽源 | 申请（专利权）人： | 四川省农业科学院土壤肥料研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 610066 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种3’-cDNA展示方法，步骤为：(1)以总RNA(或者mRNA)为模板，以设计合成的Oligo (dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo (dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增。(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。本发明应用“Y”形接头与酶切片段连接，抑制非PolyA末端的cDNA扩增，让具有“Y”形接头及PolyA末端的cDNA得到指数扩增，排除了非PolyA末端cDNA的干扰，从而只扩增cDNA 3’末端序列，具有经济性好、效率高、可靠性强、冗余度低及假阳性低等优点，能够同时研究多个样本多个时期的生物体mRNA时空特异表达情况，是发掘基因的功能、探索生物发育机制等的有力工具。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 cdna 展示 方法 | ||
【主权项】：
一种3’‑cDNA展示方法，其特征在于，该方法的主要步骤包括：(1)以总RNA 或者mRNA 为模板，以设计合成的Oligo (dT)18V引物通过反转录合成cDNA双链；(2)将步骤(1)得到产物通过TaqⅠ内切酶进行酶切；(3)将步骤(2)产物与设计合成的“Y”形接头用T4连接酶连接；(4)以Oligo (dT)18V及TaqⅠ“Y”形接头序列设计引物进行PCR扩增；(5)变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
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