[发明专利]一种蚓激酶干粉的制备方法

摘要

本发明涉及一种蚓激酶干粉的制备方法，该方法包括如下步骤：将冷冻后的鲜蚓室温化冻，制浆，生物酶处理，离心经过滤膜澄清，超滤去除小分子杂蛋白，再经过滤膜二次澄清，调节pH值，经阴离子交换层析，得澄清液浓缩超滤，澄清过滤，冻干，得到蚓激酶干粉。本发明提供的蚓激酶干粉制备方法，具有制备方法质量可控性和稳定性高，分阶段、可控的收集目标物，提高蚓激酶的总活性收率，收率稳定，降低制备成本，减少层析介质污染，且易于大规模工业化生产等特点。

主权项

一种蚓激酶干粉的制备方法，包括如下步骤：1)蚯蚓清洗和解冻：将鲜蚯蚓用水清洗后，洗去污泥和粘性物，然后贮存在冷库中备用；将冻蚓室温放置自然化冻；2)制浆：加入蚯蚓体积的0.5～2倍的水，将经步骤1)化冻后的蚯蚓粉碎，制成匀浆；3)生物酶处理：将步骤2)得到的匀浆在30～40℃，优选35～40℃保温，同时加入中性蛋白酶，按蚯蚓重量的0.1%～0.3%加入匀浆液中，保温静置2～6小时，优选保温静置2～4小时；4)离心：将步骤3)的匀浆液定量的加水稀释，最终定容体积至2～3.5倍，通过蝶片式离心机除去其中的粗渣；5)澄清：经步骤4)除渣后的的离心液，输入到膜过滤系统内，加水洗涤，得到一次澄清液；6)超滤：步骤5)得到的澄清液采用中空纤维柱超滤，得到超滤液；7)澄清：经步骤6)超滤后的溶液经泵再次打入膜过滤系统，加水洗涤，得到二次澄清液；8)调节PH：配制0.5～1M的氢氧化钠溶液，调整步骤7)得到的澄清液至pH6.5～8.5，用PH计监测；9)层析分离：采用阴离子交换层析柱分离步骤8)调整PH值后的澄清液，用0.3～0.9M的磷酸盐溶液梯度洗脱，洗脱液颜色变成酒红色时开始收集，洗脱至料液变清澈，颜色呈柠檬黄色或桔黄色为止；10)超滤浓缩：将步骤9)得到的洗脱液经中空纤维柱或自动化层析超滤系统超滤，除盐脱水，且溶液电导率≦0.2×103μs/cm合格；11)澄清过滤：采用纸浆板板框过滤装置，滤除步骤10)得到的浓缩液中的悬浮物质，得到澄清液；12)冻干：在洁净区将步骤11)的澄清液于－30～－40℃下冷冻10小时,继续升温至40～45℃干燥得到蚓激酶干粉。