[发明专利]一种适用于对氨基偶氮苯的人工抗原合成方法

摘要

一种对氨基偶氮苯人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明分别以对氨基苯丁酸和对氨基苯乙酸进行重氮化与苯胺进行反应，从而获得2个针对对氨基偶氮苯的衍生物1和2；同时以对氨基偶氮苯衍生物1为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白BSA偶联作为免疫原用来免疫兔子产生抗体；以对氨基偶氮苯衍生物2为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白OVA偶联作为包被原。用紫外扫描仪测定偶联物的偶联比。本发明成功合成了对氨基偶氮苯的人工抗原，合成步骤简洁，有效，并且在应用于免疫分析中获得针对对氨基偶氮苯特异性非常好的抗体，可以满足国内对其研究的需要。

主权项

一种适用于对氨基偶氮苯的通用人工抗原的合成方法，其特征在于分别以对氨基苯丁酸和对氨基苯乙酸进行重氮化，重氮化产物分别与苯胺进行反应，从而获得2个针对对氨基偶氮苯的衍生物1：对氨基偶氮苯丁酸，对氨基偶氮苯的衍生物2：对氨基偶氮苯乙酸；同时以对氨基偶氮苯丁酸为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白BSA偶联作为免疫原用来免疫兔子产生抗体；以对氨基偶氮苯乙酸为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白OVA偶联作为包被原，用来建立酶联免疫检测方法；（1）对氨基偶氮苯人工抗原的制备取0.5mL的含有0.1mmol对氨基偶氮苯衍生物1的N,N‑二甲基甲酰胺DMF，加入0.15mmol碳化二亚胺EDC和0.15mmol N‑羟基琥珀酰亚胺NHS室温避光反应3h，为A液；将0.0025mmol 牛血清蛋白BSA溶解到0.01M、pH7.4的磷酸盐PBS缓冲液中，为B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应6h，离心去掉沉淀，取上清液即得人工抗原混合液；透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；将人工抗原混合液移入透析袋中，用2L的0.01M的PBS溶液透析2次和2L的去离子水透析2次，总计透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得对氨基偶氮苯人工抗原；（2）对氨基偶氮苯包被原的制备将步骤（1）中的对氨基偶氮苯衍生物1替换为对氨基偶氮苯衍生物2，其余操作均与步骤（1）相同，即得对氨基偶氮苯包被原。