[发明专利]一种适用于对氨基偶氮苯的人工抗原合成方法无效
| 申请号： | 201210369910.8 | 申请日： | 2012-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN102827271A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;李灼坤;匡华;王风艳;王利兵;刘丽强;胡拥明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K14/77 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 适用于 氨基 偶氮 人工 抗原 合成 方法 | ||
1.一种适用于对氨基偶氮苯的通用人工抗原的合成方法，其特征在于分别以对氨基苯丁酸和对氨基苯乙酸进行重氮化，重氮化产物分别与苯胺进行反应，从而获得2个针对对氨基偶氮苯的衍生物1：对氨基偶氮苯丁酸，对氨基偶氮苯的衍生物2：对氨基偶氮苯乙酸；同时以对氨基偶氮苯丁酸为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白BSA偶联作为免疫原用来免疫兔子产生抗体；以对氨基偶氮苯乙酸为半抗原，用活性酯法将其与载体蛋白OVA偶联作为包被原，用来建立酶联免疫检测方法；
（1）对氨基偶氮苯人工抗原的制备
取0.5mL的含有0.1mmol对氨基偶氮苯衍生物1的N,N-二甲基甲酰胺DMF，加入0.15mmol碳化二亚胺EDC和0.15mmol N-羟基琥珀酰亚胺NHS室温避光反应3h，为A液；将0.0025mmol 牛血清蛋白BSA溶解到0.01M、pH7.4的磷酸盐PBS缓冲液中，为B液；然后将A液缓慢滴加到B液中，室温反应6h，离心去掉沉淀，取上清液即得人工抗原混合液；
透析袋前处理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去离子水冲洗3min，保存在4℃去离子水中备用；
将人工抗原混合液移入透析袋中，用2L的0.01M的PBS溶液透析2次和2L的去离子水透析2次，总计透析3天；最后使用冻干法将透析袋中的液体制成粉末，即得对氨基偶氮苯人工抗原；
（2）对氨基偶氮苯包被原的制备
将步骤（1）中的对氨基偶氮苯衍生物1替换为对氨基偶氮苯衍生物2，其余操作均与步骤（1）相同，即得对氨基偶氮苯包被原。
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