[发明专利]一种高活性复合纤维素酶及其制备和在木质纤维酶解糖化中的应用方法

摘要

本发明公开了一种高活性复合纤维素酶及其制备和在木质纤维酶解糖化中的应用方法。利用爪哇正青霉ZN-205进行摇瓶发酵产β-葡萄糖苷酶，最佳产酶条件：初始pH为6.0，蛋白胨浓度为0.75%，微晶纤维素浓度为2.5%，吐温-80的添加量为0.05%，培养温度为28℃，250ml三角瓶装液量为100ml，摇床转速为175r/min，接种量为5%；最高β-葡萄糖苷酶活为2.312IU/ml。将爪哇正青霉ZN-205生产的β-葡萄糖苷酶与里氏木霉Rut C-30生产的纤维素酶进行酶系复合，获得最优β-葡萄糖苷酶活/滤纸酶活比值为1.4，采用该复合酶系酶解糖化木质纤维，实现了高效、低成本的酶解糖化效果。

主权项

一种高活性复合纤维素酶的制备方法，其特征在于，所述的复合纤维素酶是由爪哇正青霉ZN‑205 CCTCC NO:M208204生产的β‑葡萄糖苷酶与里氏木霉Rut C‑30 ATCC 56765生产的纤维素酶经浓缩处理，将浓缩后的酶液进行混合得到的，得到的复合纤维素酶的β‑葡萄糖苷酶活/PFA酶活比值为1.4；所述的爪哇正青霉ZN‑205 CCTCC NO:M208204生产β‑葡萄糖苷酶的过程如下：挑取一环爪哇正青霉ZN‑205 CCTCC NO:M208204孢子接种于种子培养基的摇瓶中，摇床上培养作为接种物；按摇瓶装液量体积的5%，将上述接种物接种于装有100ml产酶培养基的250ml摇瓶中，28℃，175rpm条件下培养5天；离心，上清液即为β‑葡萄糖苷酶；所述的爪哇正青霉ZN‑205 CCTCC NO:M208204产酶培养基：初始pH为6.0；微晶纤维素质量浓度为2.5%，蛋白胨质量浓度0.75%，KH2PO4 2g/L，CaCl2·2H2O 0.4g/L，MgSO4·7H2O 0.02g/L，Mandels微量元素浓缩液1ml/L，1mol/L柠檬酸缓冲液50ml/L；吐温‑80的添加质量百分比为0.05%，加水配制成1L；其中，Mandels微量元素浓缩液：FeSO4·7H2O 5g/L，MnSO4·H2O 1.6g/L，ZnSO4·7H2O 1.4g/L，CoCl2·6H2O 3.7g/L，加水配制成1L；1mol/L柠檬酸缓冲液：C6H8O7·H2O 210g，H2O 750ml，加NaOH 78g，冷却后测pH为4.2，加水至1000ml，pH为4.45。