[发明专利]一种高活性复合纤维素酶及其制备和在木质纤维酶解糖化中的应用方法

权利要求书

1.一种高活性复合纤维素酶的制备方法，其特征在于，所述的复合纤维素酶是由爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204生产的β-葡萄糖苷酶与里氏木霉Rut C-30 ATCC 56765生产的纤维素酶经浓缩处理，将浓缩后的酶液进行混合得到的，得到的复合纤维素酶的β-葡萄糖苷酶活/PFA酶活比值为1.4；

所述的爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204生产β-葡萄糖苷酶的过程如下：

挑取一环爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204孢子接种于种子培养基的摇瓶中，摇床上培养作为接种物；按摇瓶装液量体积的5%，将上述接种物接种于装有100ml产酶培养基的250ml摇瓶中，28℃，175rpm条件下培养5天；离心，上清液即为β-葡萄糖苷酶；

所述的爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204产酶培养基：初始pH为6.0；微晶纤维素质量浓度为2.5%，蛋白胨质量浓度0.75%，KH₂PO₄ 2g/L，CaCl₂·2H₂O 0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.02g/L，Mandels微量元素浓缩液1ml/L，1mol/L柠檬酸缓冲液50ml/L；吐温-80的添加质量百分比为0.05%，加水配制成1L；

其中，Mandels微量元素浓缩液：FeSO₄·7H₂O 5g/L，MnSO₄·H₂O 1.6g/L，ZnSO₄·7H₂O 1.4g/L，CoCl₂·6H₂O 3.7g/L，加水配制成1L；

1mol/L柠檬酸缓冲液：C₆H₈O₇·H₂O 210g，H₂O 750ml，加NaOH 78g，冷却后测pH为4.2，加水至1000ml，pH为4.45。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的爪哇正青霉ZN-205 CCTCCNO:M208204种子培养基：葡萄糖20g/L，蛋白胨1g/L，Mandels营养盐浓缩液100ml/L，Mandels微量元素浓缩液1ml/L，1M柠檬酸缓冲液50ml/L，加水配制成1L；

其中，Mandels营养盐浓缩液：(NH₄)₂SO₄ 14g/L，(NH₄)₂CO₃ 3g/L，KH₂PO₄ 20g/L，CaCl₂·2H₂O 4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，加水配制成1L；

Mandels微量元素浓缩液：FeSO₄·7H₂O 5g/L，MnSO₄·H₂O 1.6g/L，ZnSO₄·7H₂O 1.4g/L，CoCl₂·6H₂O 3.7g/L，加水配制成1L；

1mol/L柠檬酸缓冲液：C₆H₈O₇·H₂O 210g，H₂O 750ml，加NaOH 78g，冷却后测pH为4.2，加水至1000ml，pH为4.45。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，从保存的爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204固体平板培养基中挑取一环孢子接种于装液50ml种子培养基的250ml摇瓶中，28℃，200rpm摇床上培养2.5~3天作为接种物。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的爪哇正青霉ZN-205 CCTCC NO:M208204经过产酶培养基培养后在4000rpm下，离心10min，得到上清液。