[发明专利]导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法

摘要

导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，涉及一种导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法。是要解决目前使用大肠杆菌作为宿主表达clfA基因，研制基因工程疫苗存在侵袭性和毒性问题。方法：提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA；以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得clfA基因；提取保存于大肠杆菌JM109中的质粒pMG36c；分别对clfA基因和质粒pMG36c进行双酶切，将酶切后产物连接；将连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中，采用氯霉素筛选转化子，构建重组质粒；将重组质粒电转化乳酸乳球菌，即完成。本发明可用于研制基因工程疫苗，安全、无致病性。

主权项

导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，按以下步骤进行：一、提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA；二、以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，以MG‑CLaF和MG‑CLaR2为引物，进行PCR扩增；三、将PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，然后采用胶回收试剂盒进行纯化，获得clfA基因；四、采用质粒提取试剂盒提取保存于大肠杆菌JM109中的质粒pMG36c；五、分别对clfA基因和质粒pMG36c进行双酶切，将酶切后的clfA基因和质粒pMG36c用连接试剂盒进行连接，得连接产物；六、将连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中，采用氯霉素筛选转化子，完成重组质粒pMG36c‑ClfA的构建；七、将重组质粒pMG36c‑ClfA电转化乳酸乳球菌MG1363，即完成导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建；其中步骤一中PCR引物MG‑CLaF的序列为5′‑GCGGTCGACATGAATATGAAGAAAAAAG‑3′，引物MG‑CLaR2的序列为5′‑TTACCCGGGCAACCTACCTTACACCCT‑3′。