本发明公开了一种ClfA‑A靶位的金黄色葡萄球菌奶牛乳房炎疫苗的制备方法,提取金黄色葡萄球菌DNA,根据GenBank上已提交的ClfA基因序列,分别设计上游引物与下游引物,且向上游引物与下游引物中分别引入Bam H I和Hind III酶切位点,制得重组质粒pET‑ClfA‑A;进行PCR扩增,将重组质粒pET‑ClfA‑A转入感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导,对目的蛋白进行大量表达和纯化本发明建立的有效的金黄色葡萄球菌凝集因子蛋白(ClfA‑A)的制备,为以ClfA‑A为靶位的疫苗研究,对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎疫苗的研究提供试验依据。
本发明涉及一种金黄色葡萄球菌ITC融合蛋白,是由IsdB免疫优势片段(IsdBid)和Trap以及ClfA免疫优势片段N3区域(ClfAN3)融合而成的蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的ITC融合蛋白含有多种抗原,因此免疫效果好,提高了抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用,结果与ClfA、IsdB和TraP任意单个蛋白免疫结果相比较,ITC融合蛋白免疫效果优于单个蛋白的免疫效果,并且由于