[发明专利]导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法

权利要求书

1.导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，按以下步骤进行：一、提取金黄色葡萄球菌的基因组DNA；二、以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板，以MG-CLaF和MG-CLaR2为引物，进行PCR扩增；三、将PCR扩增产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，然后采用胶回收试剂盒进行纯化，获得clfA基因；四、采用质粒提取试剂盒提取保存于大肠杆菌JM109中的质粒pMG36c；五、分别对clfA基因和质粒pMG36c进行双酶切，将酶切后的clfA基因和质粒pMG36c用连接试剂盒进行连接，得连接产物；六、将连接产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中，采用氯霉素筛选转化子，完成重组质粒pMG36c-ClfA的构建；七、将重组质粒pMG36c-ClfA电转化乳酸乳球菌MG1363，即完成导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建；其中步骤一中PCR引物MG-CLaF的序列为5′-GCGGTCGACATGAATATGAAGAAAAAAG-3′，引物MG-CLaR2的序列为5′-TTACCCGGGCAACCTACCTTACACCCT-3′。

2.根据权利要求1所述的导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤二中PCR扩增的反应体系为20μL反应体系，由下列成分组成：

PCR扩增条件为：94℃变性2min，94℃变性15s，58℃退火30s，68℃延伸90s，共35个循环，再68℃延伸5min，4℃保温。

3.根据权利要求1所述的导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤五中clfA基因双酶切的体系如下：

酶切反应条件：37℃水浴，1h。

4.根据权利要求1所述的导入clfA基因的乳酸乳球菌基因工程菌株的构建方法，其特征在于步骤五中质粒pMG36c双酶切的体系如下：

酶切反应条件：37℃水浴，1h。