[发明专利]一种副溶血性弧菌检测试剂盒及其检测方法有效
| 申请号： | 201210062791.1 | 申请日： | 2012-03-12 |
| 公开（公告）号： | CN102586452A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 孙晓红;苏晨曦;卢瑛;赵勇;潘迎捷 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海硕力知识产权代理事务所 31251 | 代理人： | 王法男 |
| 地址： | 201306 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及的一种副溶血性弧菌的检测试剂盒，其特征在于：它包括(1)免疫富集反应体系组分：(2)环介导等温核酸扩增体系组分：(3)一套基于副溶血性弧菌tlh基因的环介导等温扩增技术的特异性引物：两条外引物F3、B3，、两条内引物FIP、BIP，两条环引物LF，LB。采用免疫富集和环介导等温扩增技术相结合的方法检测副溶血性弧菌。采用副溶血性弧菌多克隆抗体，制备免疫磁珠，采用免疫学方法进行实际样品中副溶血性弧菌的初筛，再根据其种属特异性基因tlh基因设计LAMP特异性引物，在核酸水平进行分子手段的检测，从而有效的避免了单纯的免疫学方法或者分子方法检测假阳性或漏检情况，是副溶血性弧菌快速检测的新发展方向。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 溶血 弧菌 检测 试剂盒 及其 方法 | ||
【主权项】：
一种副溶血性弧菌的检测试剂盒，其特征在于它包括：(1)免疫富集反应体系组分：偶联了副溶血性弧菌多克隆抗体的直径1.0‑2.8μm免疫磁珠；含0.02％w/v叠氮化钠、以及含0.1％w/v牛血清白蛋白的pH为7.4的磷酸盐缓冲液组成的免疫磁珠保护液；含有1％w/v牛血清白蛋白的pH为7.4的磷酸盐缓冲液组成的免疫磁珠工作液；0.05mol/L、pH为6.4的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液作为免疫富集反应液；含0‑‑0.1％Tween‑20的pH为7.4的磷酸盐缓冲液作为免疫富集洗脱液；(2)环介导等温核酸扩增体系组分：反应缓冲液由20mM KCl；20mM(NH4)2SO4、40mM Tris、8mM MgSO4、0.2％Tween‑20组成的反应缓冲液；含10mM dNTP；20μM FIP/BIP、20μMLF/LB；8000U/ml Bst DNA聚合酶；200μM羟基萘酚蓝；(3)一套基于副溶血性弧菌tlh基因的环介导等温扩增技术的特异性引物：两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP、两条环引物LF和LB。
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