[发明专利]在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法有效
申请号: | 201210057073.5 | 申请日: | 2012-03-06 |
公开(公告)号: | CN103305498A | 公开(公告)日: | 2013-09-18 |
发明(设计)人: | 陈威华;赵国屏 | 申请(专利权)人: | 中国科学院上海生命科学研究院;国家人类基因组南方研究中心 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/11 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 陈静 |
地址: | 200031 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法。揭示了一种新的在双链DNA片段末端产生预定粘性末端的方法,所述方法通过构造修饰状态与双链DNA内部不同的含可切割酶切识别位点的双链DNA末端,可以特异性地将双链DNA的末端转变成预设的粘性末端,不需要考虑DNA内部的序列组成和酶切位点组成。利用本发明的方法,可方便、快捷、准确地获得预定的粘性末端,从而实现长链DNA连接,且不引入多余的DNA序列。 | ||
搜索关键词: | dna 片段 末端 产生 预定 粘性 方法 | ||
【主权项】:
一种在双链DNA片段末端产生预定粘性末端序列的方法,包括:(i)提供一种双链DNA片段,其DNA链包括式(I)结构:B…X‑Y (I);其中,B为核酸内切酶识别位点序列;B序列与Y序列的修饰状态不同,所述的核酸内切酶特异性识别修饰状态如B的位点序列;X为核酸内切酶切割位点序列;该切割位点序列经所述核酸内切酶切割后形成预定粘性末端序列;Y为与所述预定粘性末端序列相连接的来自双链DNA片段的非粘性末端序列;…表示B与X‑Y之间存在的化学键或碱基;‑表示化学键;(ii)利用所述的核酸内切酶切割步骤(i)的双链DNA片段,从而获得末端为预定粘性末端序列的双链DNA片段。
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