[发明专利]水稻稻曲病菌毒素Ustiloxin A的提取纯化方法

摘要

本发明涉及一种水稻稻曲病菌毒素Ustiloxin A的提取纯化方法，本发明涉及一种稻曲病菌毒素A的制备纯化方法，从稻曲球或稻曲病菌毒素培养物中提取毒素，发明中所使用的提取液为2%甲酸溶液，所用净化小柱为阳离子交换柱；采用半制备型高效液相色谱仪进行分离，分离条件：流动相为甲醇与水体积比为2:8的混合液、流速为1.5ml/min，检测波长为254nm；采用薄层层析进一步纯化，展层剂为二氯甲烷与甲醇体积比为7:3的混合液。本发明突破毒素来源的限制，步骤简便效率高，所得稻曲病菌毒素UstiloxinA纯度大于90%，可做标品使用。

主权项

一种水稻稻曲病菌毒素Ustiloxin A的提取纯化方法，其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行：a)取稻曲球粉末或稻曲病菌毒素培养物粉末，加入其重量1/5的PEG，再加入其重量4‑5倍的2%甲酸溶液，置于摇床，摇床条件为室温、200转/分钟，30分钟后取出，转速为8000转/分钟离心10分钟，取上清液；b)滤渣中加入其重量等体积的甲醇，同上摇床条件，15分钟后取出，同上条件离心10分钟，取上清液；c)合并步骤a和步骤b的上清液，蒸发浓缩获得毒素的粗提取液1；d)先后用甲醇和5N 的氢氧化钠冲洗平衡阳离子交换柱，当溶剂液面到达氨基柱吸附层表面时，立即加入步骤c获得的毒素的粗提取液1，控制流速在1滴/秒，再先后用1/5样品体积的5%氨水和甲醇分别淋洗阳离子交换柱，最后以1/5样品体积的甲醇洗脱液洗脱下目标毒素，旋转蒸发浓缩获得粗毒素干粉；所述的甲醇洗脱液为含有5%甲酸的甲醇；e)将粗毒素干粉溶于干粉重量10‑20倍的甲醇溶剂中，通过半制备型高效液相色谱仪的分离，对照稻曲病菌毒素Ustiloxin A标样峰值的保留时间收集得到毒素的粗提取液2；所述的甲醇溶剂中甲醇与水的体积比为2:8；f)将步骤e获得的毒素的粗提取液2与稻曲病菌毒素Ustiloxin A标样分别均匀点在硅胶GF254薄层层析板的下端，将层析板放入层析缸中，于展层剂中展开，直至展层剂跑至距层析板顶端2厘米处，拿出层析板，晾干；g)于紫外灯下照射，对照稻曲病菌毒素Ustiloxin A的标样，挖下与标样在同一位置的条带；h)将硅胶放入甲醇中浸泡，摇床15分钟后取出，室温、10000转/分钟离心，取上清，旋转蒸发浓缩，即得含量大于90%的稻曲病菌毒素Ustiloxin A。